《生物药物分析与检验》第8章 氨基酸、肽类、蛋白质和酶类药物的分析2-教学课件（非AI生成）.pptx

第八章氨基酸、肽类、蛋白质和酶类药物的分析2;上次课内容;第二节肽类药物的分析;医院里治疗疾病最贵的药物几乎都是肽类的，几乎所有的慢性疾病都必须通过肽类药物治疗！

肽具有原蛋白质和单体氨基酸不具备的独特的生理活性和医疗保健作用，具备营养、保健、治疗三重功能。;临床肽类药物举例;临床肽类药物举例;醋酸格拉替雷

治疗硬化症，2011销售额超40亿美元;临床肽类药物举例;目前很多医生都无权开具的红色处方药，世界上最好的顶级抗菌消炎药万古霉素【复合多肽】;多肽药物的成药性高于一般化学药物，其生物活性高，特异性强，毒性反应相对较弱，在体内不易产生蓄积，与其他药物的相互作用比较少，与体内受体的亲和性比较好。

多肽分子的稳定性较差，在体内容易被降解，因而半衰期较短，需要连续给药以维持其药效，给患者带来不便。

化学合成、提取;二、鉴别试验;二、鉴别试验;二、鉴别试验;三、检查;四、含量检测;四、含量检测;比吸光系数法;标准曲线法

取系列浓度标准溶液，测定吸光度A，作吸光度A对溶液浓度c的图，得过坐标原点的直线。

在相同条件下，测量被测溶液的吸光度，在标准曲线上查得溶液度。;对照品比较法

预先配制一个与待测液浓度相接近的标准溶液(其浓度用cs表示)，测得其吸光度为As，再测定待测液的吸光度Ax，则待测液浓度cs可从下式求得

;四、含量检测;微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素药品的抗菌活性；

多组分抗生素由于不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、含量和生物活性间的关系；

许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的化学分析方法表征其活性。

;抗生素微生物检定法;抗生素微生物检定法可分为：

（1）稀释法

（2）比浊法

（3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）

各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。?

;稀释法;;比浊法;琼脂扩散法（管碟法、打孔法）;抑菌圈的形成;29;管碟法测定抗生素效价

原理和方法;抗生素的微生物检定法过程;下层培养基;上层培养基;加样;培养;36;37;38;抗生素微生物检定方法比较：;四、含量检测;;蛋白类药??的分类;细胞生长调节因子;酶类药物;蛋白质类激素;胶原蛋白;一、蛋白质类药物的鉴别

蛋白质类药物可根据其各自的物理、化学性质、生理作用等采用不同的方法进行鉴别。

（1）茚三酮反应

（2）福林酚反应或双缩脲反应

（3）紫外吸收

（4）生物学法;1、分子量检查（常用的蛋白质分子量测定方法？）

常用还原型SDS法检查分子量，用量约1μg。

也可采用凝胶过滤法；

凝胶过滤是测定完整蛋白质分子的分子量，而SDS是测定蛋白质亚基的分子量;蛋白质产品纯度是一项重要指标，但它也是一项相对的指标，需根据实际要求而定。

蛋白质纯度一般是指是否含有其他杂蛋白，而不包括盐、缓冲液离子、SDS等小分子在内。

目前较常用的是HPLC法（包括凝胶过滤、各种反相HPLC、离子色谱、疏水色谱等）、非还原SDS凝胶电泳法、毛细管电泳法（CE）、等电聚焦电泳

;凝胶过滤中=纯，能否作为判定依据？

离子色谱中却分辨为二个组分，反之亦然。

凝胶过滤法和SDS电泳证明是纯的，能否作为判定依据？

机理相同

至少应用两种以上的方法，而且是两种不同分离机理

;3、等电点测定

等电点是蛋白质的物理化学常数，它表示蛋白质的带电性质。

一般采用凝胶等电聚焦电泳技术测定等电点。

溶解度、酸碱电位滴定

4、吸光度或吸光度比值（紫外吸收）

不同的蛋白质分子都有其特定的紫外吸收，对于某种蛋白质或多肽来说，它的最大吸收波长是固定的。

紫外吸收光谱是检查蛋白质的一个重要指标。;三、蛋白质含量测定和效价测定

1、蛋白质含量测定

蛋白质的定量可用化学方法如凯氏定氮法、双缩脲法、福林酚法、紫外光吸收法来测定；

也可用染色法，如氨基黑、考马斯亮蓝测定；

此外还可用荧光激发、氯胺T、放射性核素计数等灵敏度较高方法。

上述方法中凯氏定氮法、福林酚法、紫外光吸收法最为常用，它们操作简单、设备便宜。;（1）凯氏定氮法常用来测定有机物的含氮量。;;操作方法：;凯氏定氮法优缺点;紫外吸收法;紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。

低浓度的盐，例如生化制备中常用的（NH4）2SO4等和大多数缓冲液不干扰测定。

特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。;此法的缺点是测定蛋白质含量的准确度较差，干扰物质多在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。

若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰。核酸在紫外区也有强吸收，其干扰可以