2025年液相色谱中常用的柱前衍生化方法 液相色谱技术指标.pdfVIP

臣心一片磁针石，不指南方不肯休。——文天祥

液相色谱中常用的柱前衍生化方法液相色谱

技术指标

液相色谱使用较多的是紫外检测器，为了使一些没有紫外吸取

或紫外吸取很弱的化合物能被紫外检测器检测，往往通过衍生化反

应在这些化合物的分子中引入有强紫外吸取的

液相色谱使用较多的是紫外检测器，为了使一些没有紫外吸取

或紫外吸取很弱的化合物能被紫外检测器检测，往往通过衍生化反

应在这些化合物的分子中引入有强紫外吸取的基团：2,4—二硝基苯、

苯甲基、对硝基苯甲基、3,5—二硝基苯甲基、苯甲酸酯、对甲苯酰、

对氯苯甲酸制、对硝基苯甲酸酯、对甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、

对溴苯甲酰甲基，这些衍生物可被紫外检测器检测。

大多数紫外衍生反应来自经典的光度分析和有机定量分析，新

的衍生化反应和衍生化试剂是随液相进展而进展的，这些反应的原

理都来自有机合成，所以就要求操对有机合成有所了解。但是，由

于柱前衍生化是为色谱分析准备样品，处理样品的量小（mg级），

所用的小型和微型反应器皿又不同于常量的有机合成，而是仿佛于

近年来进展的微量有机合成。紫外衍生化反应要选择反应产率高、

重复性好的反应。过量试剂和试剂中的杂质假如干扰下一步的色谱

分别和检测，则在色谱进样前要进行纯化分别。还要注意反应介质

对紫外吸取的影响。

（1）苯甲酰化反应：苯甲酰氯及其衍生物——对硝基苯甲酰氯、

3,5—二甲基苯甲酰氯和对甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚类化

合物反应，生成紫外吸取的苯甲酸酯类衍生物；

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其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。——《论语》

（2）2,4—二硝基氟代苯（DNFB）的反应：DNFB与醇的反应产

率很低，但可与大多数伯胺、仲胺和氨基酸反应，生成强紫外吸取

的苯胺类衍生物；

（3）苯基异硫氰酸酯（PITC）的反应：PITC可与氨基酸反应，

生成苯基己丙酰硫脲衍生物——PTH氨基酸；

（4）苯基磺酰氯的反应：苯基磺酰氯可与伯胺和仲胺反应。

甲苯磺酰氯可与多氨基化合物反应，不仅能提高它们的检测灵

敏度，还可更改HPLC的分别度。

（5）有机酸的酯化反应：有机酸很简单与酰溴基反应生成酯，

常用的酰溴基试剂有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、对溴基苯甲酰溴

和对硝基苯甲酰溴等；

酯化反应在极性溶剂（如乙腈、丙酮或四氢呋喃）中进行，有

时需要加催化剂，如冠醚加钾离子、二乙胺或N—二异丙基胺等。

（6）羰羟基化合物的反应：醛类和酮类中的羰基可与2,4—二

硝基苯肼（DNPA）反应，反应在弱酸性条件下进行，生成苯腙衍生

物。

羰基化合物还可以与对甲基苄基羟胺（PNBA）在碱催化下反应，

生成有强紫外吸取的肟。

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老当益壮，宁移白首之心；穷且益坚，不坠青云之志。——唐·王勃

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