基因操作及其医学应用2讲义.pptVIP

转基因和基因治疗0201030405基因治疗的基本类型概念和研究现状转基因的基本方法基因治疗的运用和前景转基因的表达和调控转基因和基因治疗内容提纲基因治疗是以正常基因替代或置换靶细胞染色质基因组中的致病基因从而产生新表型的治疗方法。01转基因技术则是将目的基因导入靶细胞以建立治疗效应的方法和过程。02转基因及基因治疗基本概念01转基因及基因治疗06viral05基因治疗02目的基因04转基因07nonviral10体内调控09exvivo03基因表达08Invivo基因治疗的程序细胞介导的基因治疗(exVivo)是当前较常用的形式。是选用适当的靶细胞载体外进行基因转移，筛选阳性细胞重新移植入体内。可用原代或细胞系进行。但靶细胞存活较短暂（Transit)。基因治疗的基本类型体外表达基因治疗(inVitro)01是传统的基因表达形式。02转基因的基本方法非病毒法(Nonviral)病毒法(Viral)和逆转录病毒(Restrovirus)RNA病毒，结构缺陷PackagingCell病毒法(Viral)转基因及基因治疗转基因的基本方法转基因及基因治疗体内直接转基因治疗（inVivo）是最有前途的方式。已在肝、气管、肌肉、乳腺、腹腔动、静脉初获成功。效果持久。但转移和表达效率低。基因治疗的基本类型优势：整合率高;对外源DNA影响小;单拷贝整合，利于表达调控；安全。转基因及基因治疗转基因的基本方法转基因的基本方法劣势：①容量小;②只能感染分裂活跃细胞，体外(Exvivo)转基因;③Transiteexpression;④R.V.+P.C+P.C实验室要求高。转基因及基因治疗腺病毒(Adenovirus)腺相关病毒(Adenoassociatedvirus)DNA病毒E1和E3基因缺乏263细胞系生长转基因及基因治疗转基因的基本方法转基因的基本方法特点：①能感染静止细胞，体内(invivo)转基因②对某些细胞类型特别亲和力，利于局部基因治疗③包容量大④尚无PackagingCell，欠安全⑤有较强免疫原性，易引起体内免疫反应转基因及基因治疗磷酸钙沉淀法(CaPO4precipitation)非病毒法(Nonviral)显微注射法(Microinjection)基因定位整合技术(Genetargeting)受体介导(Receptor-mediatedmethods)组织内直接注射(DirectinjectionofDNA)030405060102转基因及基因治疗转基因的基本方法基因定位整合技术

（基因打靶GeneTargeting)通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。这一技术称为基因打靶。若定向敲除某个基因，称为基因敲除（geneknockout）；若定向将一段基因序列替代另一段基因序列，则称为基因敲入（geneknockin）。基因打靶的概念基因打靶的必要条件打靶载体打靶载体中的必要成分：载体DNA目的基因同源片段筛选标志基因neu（新霉素）阳性筛选标志基因；HSV-tk阴性筛选标志基因。胚胎干细胞构建打靶载体基因敲除的基本程序获得目的基因的同源片段，将此片段克隆到一般的质粒载体中；从重组质粒中切除目的基因的大部分同源DNA序列，只留部分序列在线性质粒载体的两端；在目的基因同源序列的外侧线性化重组质粒载体，将HSV-tk基因克隆到此线性载体中。将neu基因克隆到带有目的基因同源序列的线性质粒中，使之位于残留目的基因同源序列的中间；01020304打靶载体导入ES细胞基因敲除ES细胞注射入胚泡胚泡植入假孕的小鼠子宫中嵌合体的杂交育种转基因的基本方法转基因及基因治疗附表外源DNA的整合Table1.Methodsofdeliveringgenesintomammaliancellsandlikelyapplicationsingenetherapy(+).Majorapplication:(+/-),someapplication;(-).Littleornoapplication;T.onlytransientexpression;S.stableexpression内含子(intron)在转基因过程中，内含子可