DB34T 2815-2017 羽绒羽毛中沙门氏菌检测方法 酶联免疫法.docxVIP

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DB34

安徽省地方标准DB34/T2815—2017

羽绒羽毛中沙门氏菌检测方法酶联免疫法

MethodfordetectionofSalmonellaindownandfeather:Euzymelinked

immunosorbentassay（ELISA）

2017-03-30发布2017-04-30实施

安徽省质量技术监督局发布

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。

本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院。

本标准主要起草人：孙娟娟、陈雪娇、李云飞、宗凯、郑海松、余晓峰。

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DB34/T2815—2017

羽绒羽毛中沙门氏菌检测方法酶联免疫法

1范围

本标准规定了羽绒羽毛中沙门氏菌的酶联免疫检测方法。

本标准适用于各种品种、规格的羽绒羽毛及其制品填充料中沙门氏菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3基本信息

沙门氏菌（salmonella）为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌，（0.7～1.5μm）×（2～5μm）散在，无荚膜和芽孢，（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外）都具有周身鞭毛，能运动，大多数具有菌毛，能吸附于宿主细胞表面或凝集豚鼠红细胞。沙门氏菌具有复杂的抗原结构，一般沙门氏菌具有菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面抗原(荚膜或包膜抗原)三种抗原，目前已知有2000多种血清型。

4方法原理

根据沙门氏菌在选择性培养基上形成的菌落特征，或根据酶联免疫筛选的阳性结果挑出可疑菌落，依据进一步的生化鉴定以及血清学鉴定的结果，对沙门氏菌进行判定。

5仪器设备

恒温培养箱、冰箱、干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、均质器、振荡器、水浴锅、摇床、电子天平、硝酸纤维素薄膜（0.45μm）、抽滤器、无菌锥形瓶、无菌塑料袋无菌吸管10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头、无菌培养皿、无菌试管、pH计或pH试纸、全自动免疫酶标分析仪、全自动微生物生化鉴定系统。

6培养基和试剂

缓冲蛋白胨水（BPW）、四磺酸钠黄绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖蓝氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂、沙门氏菌属显色培养基、沙门氏菌O和H诊断血清、生化鉴定试剂条、生化鉴定卡。

实验用水应符合GB/T6682的规定。培养基的配制见附录A。

2

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7检验程序见图1。

毛检样

毛

检样

12g样品+1200mLBPW两份↓室温，摇床3h

2000mL0.45um滤膜过滤

滤膜+100mLBPW

36℃±1℃,18～24h

10mL1mL+SC10mL

XLD或沙门氏显色

18～24h

挑取可疑菌落

生化鉴定试剂盒全自动微生物生化鉴定系统

沙门氏菌，血清学试验非沙门氏菌

报告

阳性酶联免疫筛选

36℃±1℃,

1mL+TTB

阴性

BS

图1羽绒羽毛中沙门氏菌的检验程序

8操作步骤

8.1试样前处理

用无菌镊子和剪刀取出两个各12g样品，称量，精确到0.1g,放入烧杯中，每个烧杯加入1200ml0.1%蛋白胨生理盐水，室温下，摇床摇匀(160rpm)或机械(加玻璃珠)搅拌3h,无菌纱布过滤后混合滤液，取2000ml原始滤液，用过滤器经孔径0.45μm滤膜过滤，滤膜取下，放入装有100mlBPW的均质袋中进行前增菌。36℃±1℃培养18～24h。

8.2沙门氏菌分离培养

轻轻摇动培养过的样品前增菌混合液，移取1ml,转种于10mlTTB中，于42℃±1℃培养18~

24h。同时，另取1ml,转种于10mlSC中，于36℃±1℃培养18～24h。

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