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实验二：对流免疫电泳实验报告
实验者：毛寰宇时间：2015年3月25日合作者：周鹏、张国栋
一、实验原理
对流免疫电泳是双向琼脂扩散与电泳分析的结合产物。CIEP是一种加速的免疫双扩散
技术。在琼脂糖凝胶平板的两个孔中分别加入抗原和抗体，抗体侧连接电源正极。通电后，
带负电荷的抗原向抗体孔方向移动，而抗体则由于电渗作用被带向抗原孔侧。两者相遇时形
成沉淀物。可用于检测抗原，但敏感性较低。
在pH8.6的缓冲液中，大部分蛋白质抗原成分（等电点约3~5）常带较强的负电荷，在
电场中向正极移动；而作为抗体的IgG，等电点偏高(约为5~6)，在pH8.6时带负电荷较少，
再加上分子量较大，移动速度慢，所以它本身向正极移动缓慢甚至不移动，这样它就会在凝
胶的电渗作用下，随水流向负极，电渗引向负极移动的液流速度超过了IgG向正极的移动，
因此抗体移向负极，在抗原抗体最适比处形成沉淀线。
二、实验材料
1、抗原抗体
2、微量可调加样器、加样头、玻片
3、打孔器、针头、打孔样纸（均放平皿内）
4、电泳液、电泳槽、电泳仪、标签纸
5、1.2%琼脂糖(加热溶化）、5ml刻度吸管、吸耳球
三、实验步骤
1、制版与打孔：取洁净玻片，将1.2%融化的琼脂3~4ml均匀浇注于玻片上，厚度约
1.5~2.0mm。待琼脂凝固后，放置于打孔样纸上，按样纸上图形打孔。
2、用水倍比稀释抗体：原液、1:2、1:4、1:8。
3、加样：在加样孔中加入5μl待测抗原样品（人IgG）和抗体（羊抗人IgG血清）。靠
近负极的孔中加入抗原，正极端的孔中加入抗体，玻片标记抗原抗体方向。
4、电泳：将已加样的琼脂板平放于电泳槽内，以纱布为桥，电压为100v，时间约30min。
Ab原液Ab1:2
AgAg
负极正极
AgAg
Ab1:4Ab1:8
四、实验结果
图1：实验电泳结果
A.原液、1:2、1:4稀释抗体条
件下均可见沉淀线；1:8稀释
度不能见沉淀线。
B.抗体稀释到1:2后，可见沉
淀线向抗体侧移动。1:2和1:4
条件下沉淀线位置差异较小。
C.在原液条件下，沉淀下大致位于两孔中线，直线形状，弧度不明显。随着抗体稀释，沉淀
线逐渐变成弧形和斜线形。
图2：另一小组电泳结果
A.原液、1:2、1:4稀释条
件下均可见沉淀线；1:8
稀释度不能见沉淀线。
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