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油脂中营养成分测定方法

油样的前处理

取3g油样于分液漏斗中，加入15mL正己烷溶解油样，加入5mL80%甲醇萃取多酚等物质，摇匀，共萃取3次，合并甲醇相。取25mL正己烷加入甲醇相中，萃取2min，弃去正己烷相，得到甲醇样液。吸取1mL甲醇样液，按照标曲方法测定油样中的多酚和黄酮物质含量。

1多酚的测定

1.1标准曲线的绘制

根据Folin-Ciocalteu法，称取0.1000g没食子酸标准品，加2.5mL乙醇溶于1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度(100mg/L)。分别吸取标准溶液2、3、4、5、6、7mL至10mL容量瓶中，定容(20、30、40、50、60、70mg/L)。取1mL上述标准液、0.5mL福林试剂(2mol/L)加入10mL容量瓶中，混匀，于30s后8min前加入10%NaCO溶液1mL，定容，常温下反应1h，于765nm处测定吸光度23

值。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2油样中多酚的测定

取待测液1mL于25mL容量瓶中，以下操作同1.1项，测定其在765nm处的吸光度A，由回归方程计算多酚含量。

2黄酮的测定

2.1标准曲线的绘制

准确称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥(60?，0.09Mpa)至恒重的芦丁标准品0.0770g，用60%乙醇溶解，定容至250mL，摇匀，得浓度为0.2926mg/mL

的标准应用液，放置低温暗箱内，及时检测。

分别吸取标准应用液0，1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL，6.0mL(即浓度为0，11.70mg/L、23.4mg/L、35.1mg/L、46.8mg/L、58.5mg/L、70.2mg/L)于25mL容量瓶中，分别用60%乙醇添至10mL，加入5%NaNO溶液1.0mL，2

摇匀，放置6min，再加入10%Al(N0)溶液1.0mL，6min后加入4%NaOH溶液33

10mL，混匀，再用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min后在波长510nm处测定吸光度A，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。2.2油样中黄酮的测定

取待测液(使用多酚的待测液)1mL于25mL容量瓶中，以下操作同2.1项，测定其在510nm处的吸光度A，由回归方程计算黄酮含量。

3、原花青素的检测方法(香草醛-硫酸显色法)

取待测液(使用多酚的待测液)1mL至10mL的容量瓶中，加入4%香草醛-甲醇溶液2.5mL及30%的硫酸-甲醛溶液2.5mL，混匀后于30?水浴避光保温15min，以试剂为空白测定A。由回归方程计算原花青素含量。500

标准曲线如下:

原花青素的标准曲线

原花青素含量计算:

D=(V×C×n/1000W)×100%

(D:试样中原花青素的百分含量;V:试样定容体积ml;C:试样中原花青素浓度mg/ml;n:稀释倍数;W:试样重量g)

4、叶绿素和类胡萝卜素的测定

将7.5g茶油溶解在环己烷中，定容至25ml，测定其在470nm和670nm处的吸光度值。

叶绿素在670nm处有最大吸收峰，类胡萝卜素在470nm处有最大吸收峰。脱镁叶绿素(叶绿素中主要成分)和芦丁(类胡萝卜素的主要成分)的消光系数分别为613和2000，结果按照下式计算:

6叶绿素(mg/kg)=(A670×10)/(613×100×d)

6类胡萝卜素(mg/kg)=(A470×10)/(2000×100×d)

其中A是吸光值，d是比色槽的宽度(1cm)

平行测定结果之差应不超过1mgPkg,以二次测定结果的平均值为实验结果。

5甾醇的测定

5.1β-谷甾醇标准曲线的制作

用移液管分别准确移取0.3、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL标准溶液于10mL容量瓶中,用乙酸酐稀释至刻线,其浓度分别为0.030、0.050、0.100、0.200、0.300、0.400、0.500mg/mL.然后分别加入10滴浓硫酸于容量瓶中,显色10min,在660nm(待测定)下用分光光度计分别测定其吸光度A,以谷甾醇量为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线.

5.2样品中总甾醇含量测定

准确移取2.0mL配制好的茶油样品溶液于10mL容量瓶中,用乙酸酐定容,加入10滴浓硫酸,溶液颜色由无色经红色变成暗绿色,稳定10min后用分光光度计在660nm处测其吸光度。由回归曲线方程计算样品中总甾醇的含量.6茶皂素测定

茶皂素对甲基红呈酸性，难溶于无水甲醇、乙醇，不溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚等有机溶剂，易溶于含水甲醇、含水乙醇、以及冰醋酸、醋酐、吡啶等。

采用香草醛——浓硫酸显色法，具体过程如下:

【所需试剂配制:】

8%(W/V)香草醛溶