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真核生物的转录起始-
特异诱导性转录因子的作用模式
罗杰
华中农业大学
DNA结合域和转录激活域的独立性
RogerBrentMarkPtashne
转录激活域fromGAL4protein(yeast)
+
DNA结合域fromLexArepressor(E.coli)
chimericfactor
构建三种重组质粒转入酵母(Y2H)
GAL1operator
UASGLacZasreporter
GAL4转录激活域GAL1operator
LexDNA结合域LacZasreporter
GAL1operator
LexALacZasreporter
嵌
合
转GAL4+UASenhancingGAL1LacZ
录
因
子NoactivatornoLacZexpressing
的
活
性
LexA+LexAopGAL4activationGAL1LacZexpressing
转录激活域和DNA结合域可彼此独立发挥作用!
激活域的功能
招募RNA聚合酶结合到启动子上
GAL1operator
LexALacZasreporter
酵母双杂交技术将研究的cDNA与AD/BD分别构建两个表
2达载体转化酵母测验体系
YHassay
reporter
转录因子
Xp与Yp相互作用
筛选与Z蛋白相互
作用的D蛋白
通过X-gal,检测报告基因Lac-Z表达水平
Cell89(2may)1997
Trans-factor与cis-factor结合的通用原则
⚫特异位点间形成氢键的位点专一性结合
•Trans因子-Cis因子间的
识别与结合多发生在具有
与构型相关
足够信息的DNA的大沟内
与DNA结合•蛋白质氨基酸与DNA碱基
氢键结合
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