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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

PAGE及western

一.实验目的

一

.实验目的

1.学习SDS测定蛋白质分子量的原理

•2.掌握垂直板电泳的操作方法

•3.熟悉蛋白印迹技术原理和方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE及

western

二.实验原理

•SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:是在聚丙烯酰胺

凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）

•1967年，Shapiro等人首先发现，如果在聚丙烯酰

胺凝胶电泳(聚丙烯酰胺凝胶中主要取决于三种因

素：蛋白大小，形状和电荷)系统中加入一定量的

十二烷基硫酸钠（SDS），则蛋白质分子的电泳迁

移率主要取决于蛋白质的分子量大小？

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SDS的作用

•SDS是一种阴离子去垢剂，SO32-带负电荷。

因此蛋白质在含有强还原剂的SDS溶液中

与SDS分子结合时，可形成SDS-蛋白质复

合物。这种复合物由于结合大量带负电荷

的SDS，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，

蛋白质本身带有的电荷则被掩盖了。从而

起到消除各蛋白质分子之间自身的电荷差

异的作用

•因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则

主要取决于蛋白质分子大小

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当蛋白质的分子量在15,000－200,000之

品的迁移率与其分子量的对数呈线性关系。

符合如下方程式：LgMW=－bmR+K

其中，MW为蛋白质的分子量，m为相对迁移

R

率，b为斜率，K为截距。当条件一定时，b与K均

为常数

因此通过已知分子量的蛋白与未知蛋白的比较，

就可以得出未知蛋白的分子量

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SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)按照缓冲

液的pH值和凝胶孔径的差异及有无浓缩效应分为

连续系统和不连续系统两大类

连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相

同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛

效应

不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶

浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳

动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，

因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE及

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Gel

5%10%15%

200

20020097