SN∕T 5179-2021 二代测序法检测蜚蠊携带细菌性样品制备方法.pdf

ICS11.020

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SNIT5179-2021

二代测序法检测萤蝶携带细菌性样品

制备方法

Protocolforsamplepreparationofcockroach-bornebacteriadetectionwith

next-generationsequencing

2021-06-18发布2022-01-01实施

中华人民共和国海关总署发布

SN.厅5179-2021

前言

本文件按照GB/f1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

本文件起草单位2中华人民共和国拱北海关。

本文件主要起草人：陈健、邱德义、刘恭源、魏晓雅、刘德星、李婷婷、岳巧云。

I

SN.厅5179-2021

二代测序法检测萤蝶携带细菌性样晶

制备方法

1范围

本文件规定了萤镰携带细菌性样品进行二代测序检测的样本采集、前处理、体内外携带细菌的

收集及基因组DNA的获取和扩增等操作程序。

本文件适用于利用二代测序技术对本底调查或口岸截获的蛮蝶携带未知细菌进行高通量检测鉴

定的样品制备工作。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注目期的寻｜用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB厅“82分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

SN厅2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员

SN厅4278-2015国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程

ws厅230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

引物标语primermarker

在常规引物5＇端加人的一段6～12个随机设计的碱基酬，用于标记并区分特定样品的扩增反应。

3.2

标签引物labeledprimer

由引物标记加常规引物两部分构成，每一个样品进行PCR扩增时需保证使用的一对引物中，至

少有一条与其他样品使用的引物标记不同。

3.3

高成功率PCR酶highsuccessratePCRpolymerase

可成功扩增普通TaqDNA聚合酶难以扩增样品的一类新型DNA聚合酶。针对含多种PCR扩增抑

制物质的粗样品，该酶具有优良的延伸性。常见的有KOD阳系列等。

4要求

实验室的生物安全应符合GB19489要求，实验室人员防护应符合SN厅2752.4要求，实验中用水

SN.厅5179-2021

应符合GB厅6682要求，PCR扩增检测应符合Wstr230、SN厅4278要求。

进行样本携带细菌的收集处理前，应先完成萤蝶种类的鉴定。

5仪器设备及试剂耗材

5.1仪器设备

普通台式离心机（最大相对离心力大于14()(){)g）、各量程可调移液器（10µL、20µ