包病毒步骤——精选推荐.pdfVIP

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包包病病毒毒步步骤骤

病毒包装步骤:

293T细胞(长到80%—90%)

体系:基因:18400ngPS:9200ngPM:4600ng

上诉加好以后:

1:反复颠倒10次,室温置5min

2:吸出MEM/PEI于质粒体系中,反复颠倒20次

3:室温静⽌30min,形成复合物

4:25min时取出细胞⽤PBS洗2次

5:将复合物倒⼊⽫中,培养4h

(同时备完全培养基(有⾎清⽆双抗)⼀同孵育)

6:4-5h后取出细胞,倒去复合物培养基,PBS洗2次,加⼊完全培养基10ml,培养24h

7:24h后,弃有病毒培养基,PBS洗1次,加完全培养基3.5ml

8:24h后,搜集病毒上清液,离⼼3000r/10min去沉淀,使⽤12000g离⼼5min,分装封⼝,-80度保存

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