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第十五章

免疫细胞标志和功能检测技术

第二页，共四十三页。

第一节免疫细胞的分离

第二节淋巴细胞标志及亚群分类

第三节抗原提呈细胞的表面标志

第四节淋巴细胞的功能检测

第五节其它免疫细胞功能检测技术

第六节免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用

目录

第三页，共四十三页。

第一节免疫细胞的分离

第四页，共四十三页。

外周血单个核细胞(xibāo)分离

淋巴细胞的分离

T、B细胞和T细胞亚群的分离

重点engdan提示

第五页，共四十三页。

细胞分选和基本原理

不同(bùtóng)细胞密度不同

不同细胞表面生物学特性不同

不同细胞表面分化抗原不同

细胞wbao分选和基本原理

第六页，共四十三页。

人的红细胞密度(mìdù)为1.093

粒细胞密度为1.092

单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度为

第七页，共四十三页。

第八页，共四十三页。

图24-1Ficoll分层液分离单个核细胞示意图

第九页，共四十三页。

粒细胞

红细胞

4—稀释的血浆

4单个核细胞

一稀释的血液

—分离液

2000RPM20MIN

水平离心

适用于T、B细胞(xibāo)的分离

已知CD抗原细胞亚群的分离

未知CD抗原细胞亚群的分离(阴性分选)

第十页，共四十三页。

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第十一页，共四十三页。

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免疫磁珠细胞分选原理

直接标记和间接标记

StemCellTechnologiesInc

TheCelExpertsIwww.stemcelccm

间接标记

直接标记

ENRICHMENTEXPANSIONEVALUATIONEDUCATIONEXPERTSE

第十二页，共四十三页。

第十三页，共四十三页。

Magnetic

Nanoparticles150mm(0.15μm)

Magnetemicro-bead

1.5μm

Magnetliemicro-bead

4.5μm

Phycoerythrin50nm(0.05μm)

Cell10μm

正选

需要的细胞

正选和负选

StemCellTechnologiesInc

TheColExpertsIwww.stemceilcom

标记不需要的细胞

标记需要得细胞

负选

ENRICHMENTEXPANSIONEVALUANONEDUCATNONEXPERTSE

第十四页，共四十三页。

正选

优点

·只需要一种抗体

·分离出的细胞纯度高

·对于比例小的细胞群，正选容易得到高纯度

缺点

·需要特异性的靶细胞标记

·可能引起细胞活化

负选

·需要的细胞没有被抗体等标记

·对需要的细胞，不需要特异性的细胞标记

正选和负选的比较

·需要多种抗体标记不需要的细胞

StemCellTechnologiesInc

TheCalExpertsI

ENRICHMENTUXPANSIONIVALUANONLDUCANONEXPERTSE

第十五页，共四十三页。

Positlve

负选法：

分析上清，

目的细胞在

上清液中

正选法：

去除上清，将试管移

出磁场，分析被磁珠

捕获的细胞，即为目的细胞

4吸去上清，带

有抗原的细胞留在试管里，其他细胞在吸出的上清液中

3将试管置于磁场

中，与磁珠连接的细胞被磁场吸附

2磁珠通过特

异性抗体与带

有相应抗原的细胞结合

1向细胞悬液

中加入抗体标记的磁珠

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