高中生物必修二实验十一DNA的粗提取与鉴定 .pdfVIP

实验十一 DNA 的粗提取与鉴定 教学目的 初步掌握 DNA 粗提取和鉴定的方法。 观察提取出来的 DNA 物质。 实验原理 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度是随 NaCl 的浓度变化而改变的。DNA 在 0 ．14mol/L 的 NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于 NaCl 溶液中的 DNA 析出。 DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的 DNA。 DNA ＋二苯胺蓝色（用于DNA 的鉴定） 实验步骤 1 ．材料制备 0.1G/ml 柠檬酸钠 100ml 500ml 烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min 离心 2min→吸去上清液→ 活鸡血 180ml 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡 血细胞自行沉淀） 2 ．方法步骤 取血细胞液 5-10ml ＋20ml 蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅 拌 （1 ）提取血细胞核物质 纱布过滤，滤液中含 DNA 和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械 加速血细胞破裂 （2 ）溶解核内DNA ：滤液＋2mol/LNaCl 溶液 40ml ，玻璃棒沿一个方向搅拌 （3 ）析出含DNA 的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅 拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl 溶液相当于稀释到 0 ．14mol/L ） （4 ）滤取含DNA 的粘稠物：用多层纱布过滤，含 DNA 的粘稠物留在纱布上 （5 ）DNA 粘稠物再溶解： 20ml2mol/LNaCl 溶液 50ml 烧杯， 上述粘稠物 缓慢搅拌 3 min （6 ）过滤含DNA 的 2mol/LNaCl 溶液：用 2 层纱布过滤，滤液中含 DNA （7 ）提取含杂质较少的 DNA ：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物， 用玻璃棒将丝装物卷起。 （8 ）DNA 鉴定： 实验关键： 本实验成功的关键是获取较纯净的 DNA ，因此应注意： 1 ．充分搅拌鸡血细胞液。DNA 存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后， 应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出 DNA 2 ．沉淀DNA 必须用冷酒精。实验前必须准备好大量 95%的酒精，并在冰箱中（5℃ 以下）至少存放 24 小时。 3 ．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3 ）、（5 ）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部 ， 且搅拌要轻缓，以便获得较完整的 DNA 分子。在步骤（7 ），要将玻璃棒插入烧杯溶液中 间 ，用手缓慢转动 5-10min。 【同类题库】 ．在 “DNA 的粗提取与鉴定”的实验中分别使用 2mol ／L、0 ．14mol ／L、2mol ／ L、0015mol ／L 的氯化钠溶液，其作用分别是（A ） A ．溶解、析出、溶解、溶解 C ．溶解、溶解、析出、溶解 B ．析出、溶解、析出、溶解 D ．溶解、析出、溶解、析出 ．下列图示中能反映DNA 溶解度与 NaCI 溶液浓度之间关系的是（C ） ．DNA 在下列哪种浓度的 NaCl 溶液中溶解度最低（B ） A ．2 ．00mol/L B ．0 ．14 mol/L C ．0 ．015 mol/L D ．0 ．10 mol/L ．在DNA 的粗提取过程中，初步析出 DNA 和提取较纯净的 DNA 所用的药品的浓度 和名称分别是（B ） ①0 ．1 g/ml 的柠檬酸钠溶液 ②2 ．00mol/L 的 NaCl 溶液 ③0 ．14 mol/L 的 NaCl 溶液 ④体积分数为 95%的酒精溶液 ⑤0 ．015 mol/L 的 NaCl溶液 ⑥0 ．04 mol/L 的 N