电子显微镜技术详细介绍.pptxVIP

电子显微镜技术 （electron microscope）;一、电镜的基本理论和分类（熟悉） 二、透射电子显微镜及应用（熟悉） 三、扫描电子显微镜及应用（熟悉） 四、电镜样本的取材（掌握）;; 电子显微镜以电子射线作为照明光源，以电磁场作为透镜，具有高分辨率和放大倍率的显微镜。电镜用于研究组织和细胞的超微结构。;又称电子射线 电子束带负电荷 具有光的波动性可折射性 电镜利用电子束作为“光源”成像;电子与样品作用后产生的电子信号主要有：; 当样品厚度小于100nm时，部分电子可穿透样品，将穿透样品的电子叫做透射电子，利用透射电子信息成像的称为透射电镜。; 在入射电子的轰击下，样品表面5～50nm深度激发出来的电子称为二次电子，利用二次电子信息成像的称为扫描电镜。;电子显微镜的基本类型;两点间的距离越小，表示： 分辨率 ？ 仪器所能分清被观察物体的细节 ？;0.2毫米（mm） 0.2微米（μm） 0.2毫微米（nm）; 放大倍率 ＝人眼分辨率／显微镜分辨率 （magnification） ;0.1nm 150万倍 透射电子信号成像 超薄切片等，过程复杂 二维结构，平面图像 组织细胞内部超微结构;;单颗粒技术 （Single Particle Technique ）;单颗粒技术 （Single Particle Technique ）;单颗粒技术（Single Particle Technique ）;;;; ;电子枪;TEM成像和工作原理;3.免疫电镜技术 Immune Electron Microscopy;1. 超薄切片（ultrathin section ）制备技术;;蜡片; 为什么？;－20℃冷冻后;组织未及时固定;;预固定;组织块浸泡固定; ?将固定液经血液循环灌流到动物体内,把活细胞在原位及时固定。;肾 120～140 9～10 睾丸 200～220 12～13 肝、胃肠道 160～180 9～10;灌注时一定要注意压力和速度！;常用的固定剂;目的：指将样品内所含的游离水分完全清除的过程。 (常用的脱水剂为乙醇和丙酮);浸透与包埋聚合;切片;; 将环氧树脂包埋的组织块切成100nm以下的薄切片称为超薄切片，超薄切片经电子染色后在TEM下观察组织细胞内部的超微结构。;;;3.免疫电镜技术 Immune Electron Microscopy （IEM）; 通过重金属盐在样品四周堆积,加强样品外周的电子密度，衬托样品的形态和大小。;负染色技术 （Negative staining technique ）;磷钨酸（Phosohotungstate）染色;3.免疫电镜技术 Immune Electron Microscopy （IEM）;免疫电镜技术（ IEM） immune electron microscopy;包埋后法：先包埋，制备超薄切片，后免疫标记 适用于细胞内抗原，超薄切片技术需按免疫电 镜标本制备技术进行;推荐固定液： 3～ 4％多聚甲醛 ＋ 0. 1％～0.5％戊二醛;cellular localization;? 细胞器、组织器官的超微结构 ? 原核细胞、病毒的超微结构 超微病理变化（病理诊断） 细胞成分定位 ? 生物材料复合体;TEM应用;TEM应用;TEM应用;TEM应用;TEM应用;神经元;突 触;TEM应用;;支原体;TEM应用;溶酶体增多; 凋亡;TEM应用;autolysosome;?;?;Alport 综合征;a;demonstrate the appearance and disappearance of the proteins on the vesicular membrane;;（一）扫描电子显微镜结构和工作原理 （二）扫描电子显微镜的样本制备技术 （三）扫描电子显微镜在生物医学领域的应用;☆电源和真空系统： ;二次电子探测器;Specimen chamber ; 取 材 ↓ 清 洗 用生理盐水仔细漂洗观察面 ↓ 固 定 2.5%戊二醛和1%锇酸固定 ↓ 脱 水 丙酮逐级脱水，醋酸异戊酯置换 ↓ 干 燥 临界点干燥 ↓ 镀 膜 离子溅射镀膜或真空镀膜 ↓ SEM观察; ; 在真空条件下把所要喷镀的金属加热使其蒸发并喷射到标本表面，在样品表面形成一层金属膜使样品导电。;(