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念珠菌感染菌种分布及其药物敏感性研究 细菌是条件下的病原体。一般来说，健康的人可以携带，但没有临床症状。在某些情况下,如机体抵抗力降低,可导致机体菌群失调引起念珠菌大量繁殖而致病。随着抗真菌药物的大量应用,念珠菌耐药株日益增多,且不同菌型的念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性存在差异。因此,有必要对临床分离的念珠菌做菌型分型和药物敏感性分析,以指导临床合理用药,同时监测我院皮肤、粘膜念珠菌感染的菌种变迁情况。 1 材料和方法 1.1 病例数据 1.2 基、冻干型酵母样真菌定量药敏测试盒 科玛嘉(CHROMAGAR)念珠菌显色培养基、冻干型酵母样真菌定量(MIC)药敏测试盒购自天津金章科技发展有限公司。细菌菌液浓度比浊仪购自湖南天地人生物科技发展有限公司。 1.3 菌种鉴定结果 取沙堡氏培养基上已纯化的菌落在科玛嘉(CHROMA-GAR)念珠菌显色培养基平板上画线接种,37℃培养16~24h,观察结果。根据念珠菌生长菌落在显色培养基上的颜色进行菌种鉴定,绿色—白念珠菌;蓝灰色—热带念珠菌;粉红、白色—克柔或其它念珠菌。其中非白念珠菌全部辅助以API20C AUX生化卡协助鉴定菌种。 1.4 接种浓度的确定 挑取纯化后的菌落混匀于1.5ml细菌稀释管中,用比浊仪校正至0.5~1麦氏浊度菌悬液(相当于血细胞计数1×106~5×106CFU/ml左右),以无菌滴管取比浊好的的菌液1滴加到细菌MIC稀释液瓶中混匀,再用该无菌滴管从细菌MIC稀释液瓶中取菌液2滴将所有含培养基孔加满,用96孔微型震荡器震荡5min,最终接种浓度为5×102~2.5×103CFU/ml左右。将试剂盒置于保鲜盒里放入37℃温箱中,孵育48h观察结果。 1.5 药物拖尾抑制试验 二性霉素B MIC值为生长被完全抑制的药物最低浓度孔;5-FC和咪唑类药物可能出现拖尾现象,以不含药生长对照孔为准,将不生长(0)或生长不明显(+)或明显少于(++80%生长被抑制)的孔定为MIC终点;对生长略少于对照孔(+++)或生长等于对照孔(++++)的孔定为不被药物所抑制。 1.6 sdd2-氟康唑-5-fluconazele MIC(mg/L)值:二性霉素B(Amphotericin B)S≤1,I=2,R≥4;酮康唑(Ketoconazole)S≤1,SDD 2-8,R≥16;咪康唑(Miconazole)S≤1,SDD 2-4,R≥8;伊曲康唑(Itraconazole)S≤0.125,SDD 0.25-0.5,R≥1;氟康唑(Fluconazole)S≤8,SDD 16-32,R≥64;5-氟胞嘧啶(5-Flucytosine)S≤4,I 8-16,R≥32;特比奈芬(Terbinafin)S≤0.5,SDD 1,R≥2。判读范围见表1(S表示敏感;SDD表示剂量依赖性敏感;I表示中介性耐药;R表示耐药。伊曲康唑、氟康唑、5-氟胞嘧啶药敏制定标准按照NCCLSM38—P执行,其余各药按照血药浓度制定相应的药敏判定标准)。 1.7 真菌实验室惠馈菌 采用NCCLS推荐的标准株ATCC90028白念珠菌,由第三军医大学西南医院皮肤科真菌实验室惠赠。标准株质控范围依据NCCLS提供标准,(见表1),质控菌的药敏结果符合NCCLS标准。 2 结果 2.11 克柔私家车氏金菌株,近平滑地聚酵母菌种,占组织比例 白色念珠菌94株(占85.45%),热带念珠菌6株(占5.45%),克柔念珠菌4株(占3.64%),光滑念珠菌4株(占3.64%),近平滑念珠菌2株(占1.82%)。 2.2 抗菌药物的耐药率 念珠菌属对特比奈芬基本耐药,耐药率高达94.55%;对咪康唑的耐药率为18.28%;对二性霉素B、伊曲康唑、氟康唑和5-氟胞嘧啶较敏感(二性霉素B MIC50为1mg/L,余耐药率分别为1.81%、5.45%和3.63%);对酮康唑则是100%敏感。酮康唑和伊曲康唑的MIC50和MIC90值相对较低(酮康唑0.06mg/L和0.5mg/L,伊曲康唑0.125mg/L和0.25mg/L)。对非白念珠菌中的光滑念珠菌和克柔念珠菌,氟康唑对这两种念珠菌显示出较高的耐药性(耐药率分别为50%和25%)。但对氟康唑耐药的菌株对伊曲康唑依然敏感,未发现二者交叉耐药现象。见表2,3。 3 不同人群、地区及时间对真菌检出情况的影响 念珠菌广泛存在于自然界,并寄生于人体皮肤和粘膜,属于条件致病菌。随着大量广谱抗生素的应用,糖皮质激素的广泛应用,糖尿病、性传播疾病等发病率的增加,使条件致病真菌的感染呈上升趋势。同时,新的抗真菌药物的相继问世和抗真菌药物的大量不合理应用,使临床分离的致病真菌对或多种抗真菌药物耐药现象不断增加。因此,应加强真菌耐药性监测,指导临床合理用药。 本文鉴定分析110株来自念珠菌性龟头炎