SN_T 4744-2017进出口食用动物性激素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4744—2017进出口食用动物性激素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法Determination of sexhormone residues of live animal for import and export-HPLC-MS/MS2017-05-12 发布2017-12-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局KYASO2余层查真伪 SN/T 4744--2017前 言本标准按照 GB/T 1.1---2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵孔祥、娄婷婷、张俊哲、杨爽、王玉玲。I SN/T 4744-—2017进出口食用动物性激素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了进出口食用动物雄激素、孕激素和雌激素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于出人境检验检疫工作中食用动物牛、羊、猪血清及尿中雄激素（群勃龙、勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、睾酮、甲基睾酮、康力龙），孕激素（炔诺酮、21α-羟孕酮、17α-羟孕酮、炔诺孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮)和雌激素（雌三醇、雌二醇、雌酮、已烯雌酚、己二烯雌酚、已烷雌酚)的测定。2方法提要试样中的目标化合物经酶解过夜，甲醇溶液提取，石墨碳黑柱-氨基柱串联富集净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。3规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法4试剂与材料4.1除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2甲醇：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4甲酸：色谱纯。4.5乙酸：优级纯。4.6二氯甲烷：色谱纯。4.7β葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶溶液:≥100 000 U/mL。4.8 乙酸钠。4.9乙酸钠缓冲溶液（pH5.2）：溶解43.0g乙酸钠（NaAc·4H²O)于900ml.水中，用乙酸调节pH到5.2，最后用水稀释至 1 I。4.10甲醇-水溶液（50+50,体积比）：取50mL甲醇和50mL水混合。4.11甲醇-水溶液（30十70,体积比）：取30 mL甲醇和70 mL水混合。4.122二氯甲烷-甲醇溶液（90十10,体积比）：取90 mL二氯甲烷和10 mL甲醇混合。4.130.1%甲酸水溶液：量取甲酸1 mL加水稀释至1000 mL。4.140.02%氨水水溶液：量取氨水200μL加水稀释至1000mL。4.15石墨碳黑固相萃取柱：500 mg,6 mL或相当者，使用前依次用5 mL二氯甲烷-甲醇溶液（4.12），1 SN/T 4744—20175 mL 甲醇,5 mL甲醇-水溶液（4.11)活化。4.16NH²固相萃取柱：500mg，6mL或相当者，使用前用5mL二氯甲烷-甲醇溶液（4.12)活化。4.17标准物质：群勃龙、勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、睾酮、甲基睾酮、康力龙、炔诺酮、21α-羟孕酮、17α-羟孕酮、炔诺孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮、雌三醇、雌二醇、雌酮、已烯雌酚、已二烯雌酚、已烷雌酚纯度≥95%，化合物信息参见附录A中表A.1。4.18同位素内标：睾酮-3d、甲基睾酮-3d、雌二醇-4d、雌酮-2d、已烯雌酚-d、已烷雌酚-d、17α羟孕酮-8d、醋酸甲地孕酮-3d、孕酮-d。4.19标准储备液：准确称取适量的标准品及同位素内标，以甲醇稀释成1.0mg/mL的储备液，4℃冰箱保存,有效期为3个月。4.20混合内标工作液：用甲醇将同位素标准储备液稀释成200.0μg/I的混合标准工作液。4.21混合标准工作液：根据需要用甲醇-水溶液（4.10)依次稀释成适当浓度的混合标准序列，内标浓度为 10 μg/L。4.22微孔滤膜：有机系,0.22μm。5仪器和设备5.1液相色谱仪-串联质谱仪，配备电喷雾离子源。5.2电子天平，感量力0.0001g和0.01g。5.3氮吹仪。5.4涡旋混合器。5.5恒温振荡器。5.6离心机，最高转速不小于10000r/min。5.7pH计。5.8固相萃取装置。6分析步骤6.1试样制备6.1.1血清采集动物血样，待自然凝固后分离血清分装于小管，加盖密封，2℃～8℃冷藏保存。6.1.2 尿样采集动物尿样，于4℃,8000r/min离心10min后，上清分装于小管，加盖密封，2℃～8℃冷藏保存。6.2试样处理6.2.1样品的提取称取试样1g(精确到0.01g)于50mL离心管中，加人50μL混合