SN_T 4544.1-2016商品化试剂盒检测方法 菌落总数 方法一.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4544.1—2016商品化试剂盒检测方法菌落总数方法一Commercial kit method--Aerobic count--Test method I2017-03-01 实施2016-08-23 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局涂院真 SN/T 4544.12016前言本部分是SN/T4544的第1部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、北京陆桥技术有限责任公司、中华人民共和国绍兴出入境检验检疫局。本部分主要起草人：林杰、郑晶、黄晓蓉、陈彬、董健、柯璐、戴晓丽、任明兴。 SN/T 4544.1—2016商品化试剂盒检测方法菌落总数　方法一1范围本部分规定了食品中菌落总数检验测试片（Easy TestTM Aerobic Count)的检测方法。本部分适用于肉类、鱼类和海产品、水果和蔬菜制品、乳制品和杂品等食品种类中菌落总数的测定。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB19489实验室　生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T2775一2011商品化食品检测试剂盒评价方法SN/T3266—2012食品微生物检验方法确认技术规范3生物安全措施为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测菌落总数。所有培养物和废弃物应按照GB19489和GB/T27403中的有关规定执行。4技术概要菌落总数测试片（Easy TestTM Aerobic Count)是一种预先制备好的培养基系统，含有标准的培养基和氧化三苯四氮唑（TTC)指示剂，菌落在测试片上呈红色或粉红色，这样可增强菌落计数效果。5试剂和材料5.1 菌落总数测试片(Easy TestrM Aerobic Count)本部分使用的试剂盒由北京陆桥技术有限责任公司生产，参考SN/T2775一2011和SN/T3266-2012由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录A。试剂盒储存于2℃～8℃,有效期6个月。试剂盒内测试片使用前应该回温到室温。5.2磷酸盐缓冲液(PBS)贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/LNaOH溶液调节 pH,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。1 SN/T 4544.1-2016稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。5.31 mol/L NaOH称取 40 g NaOH溶于 1 000 mL蒸馏水中。5.4 1 mol/L HCI移取浓盐酸 90 mL，用蒸馏水稀释到1000 mL。6仪器和设备6.1冰箱:2℃~8℃。6.2均质器。6.3移液管：1 mL(具0.01 mL刻度）,10 mL(具0.1mL刻度)或移液器及吸头。6.4恒温培养箱：36℃±1℃和30℃士1℃。6.5天平：感量为0.1 g。7检测程序菌落总数测试片（Easy TestTM Aerobic Count)检测方法程序见图1。检样制备样品匀液选择2个～~3个适宜稀释度各取1mL加入菌落测试片待稀释液扩散测试片的部分培养计数各测试片菌落数计算菌落总数结果报告图1菌落总数测试片(Easy Test TM Aerobic Count)检测方法程序2 SN/T 4544.1—20168操作步骤8.1样品制备、增菌培养按照GB4789.2方法进行样品制备。制备1：10的样品匀液后，无菌操作调节该样品匀液的pH为6.6～7.2，酸性样液用1mol/NaOH调节，碱性样液用1mol/LHCl调节，或根据产品标准规定的酸碱溶液来调节 pH 值。8.2样品稀释按GB 4789.2 的程序进行，培养基为菌落总数测试片（Easy TestTMAerobic Count）。?8.3接种根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2个～3个适宜稀释度检验。将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜，用吸管或者移液器吸取某一稀释度的1 mL样液，垂直加在测试片的中央处，将上层膜盖下，待稀释液扩散后放人培养箱培养。每个稀释度接种两张测试片，每张1 mL。8.4培养将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内，可堆叠至30片，36℃士1℃条件下培养48h士2h，水产品30