NY 554-2002鸭病毒性肝炎诊断技术.pdf

ICS_ 11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 554---2002鸭病毒性肝炎诊断技术Diagnostic techniques for duck viral hepatitis2002-08-27 发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部 发布 NY /T 554-2002前言鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis，简称DVH)是雏鸭的一种急性接触传染性疾病,以肝炎为主要特征，世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英),Office Intentional des Epizootic（法),OIEI把该病列为 B类疫病,我国农业部列为二类疫病。DVH 的病原为鸭肝炎病毒(DHV),根据病毒的特性不间,DHV分为 3种类型(DHV，、DHV1、DHV,）。最常见的为DHV 属肠道病毒（我国仅有此型);DHV,为星状病毒;DHV,为小核糖核酸病毒。本标推规定的雏鸭接种/保护试验和鸭(鸡)胚接种/中和试验与OIE推荐的相应方法一致。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标起草单位：华南农业大学、江苏省农业科学院。本标准主要起草人：贺东生、黄引贤、张则斌、罗函禄、刘福安。 NY/T 554--2002鸭病毒性肝炎诊断技术１范围本标规定了鸭病毒性肝炎的雏鸭接种/保护试验和鸭（鸡）胚接种/中和试验的技术要求。本标准适用于鸭病毒性肝炎的诊断及检疫。2雏鸭接种/保护试验2.1材料准备2.1.1研钵或平皿,玻璃匀浆器，10 mL带胶塞玻璃瓶。2.1.21mL 和 5 mL注射器及针头。2.1.30.22um微孔滤膜及滤头。2.1.4离心管、手术剪刀和手术镊子。2.1.50.85%生理盐水：在使用前加人青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/mL和2000μg/mL.2.1.6DHV 高免血清(在国内诊断检疫仅用 DHV1,对进境鸭的检疫还应加上 DHV,、DHV 抗血清）。2.1.7雏鸭：1～5日龄75只易感健康雏鸭。2.2操作方法2.2. 1 病料处理在无菌室内超净台上无菌采取数例病鸭的肝脏组织10g，于研钵或平皿中剪碎，用玻璃匀浆器制备组织匀浆,按1：10(W/V)加人生理盐水。将勾浆液转至离心管中，3000r/min离心10min。弃去上层脂肪，拍取中间清亮的液体，再经过0.22um的灭菌微孔滤膜过滤，收集滤过的液体，作为病料样品直接接种；或装人10mL玻璃瓶中，盖上胶塞，置专用的密闭铁盒里，于20℃保存待检，保存期不超过1年。2.2.2试验选取75只健康雏，分为A、B和C三组，每组25只，做如下处理：A组(攻毒保护组）：每只鸭颈背部皮下注射1 mL DHV高免血清。24 h 后，每只鸭皮下注射0.2mL的待检样品。B组（攻毒组)：每只鸭颈背部皮下注射0.2 mL的待检样品。C组（对照组）：每只鸭颈背部皮下注射 0.2 mL的生理盐水。将上述三组鸭置于相同的管理条件下，隔离饲养，连续观察。2.3结果判定当C组没有任何一只雏死亡时,对照试验才成立，可进行如下判定,否则应重检。阳性（+）：B组特征性死亡1的鸭只总数达30%以上（含30%），而A组死亡的鸭只总数低于10%(含 10%)。可疑（±）：B组特征性死亡的鸭只总数低于30%，而A组的鸭只不死亡。此可疑结果应重检，仍为可疑时则判为阳性。1）特征性死亡指死亡的胚胎出现如下任何一种病变:尿囊液变绿、肝脏肿大、肝有出血斑点或有坏死灶。 NY/T 554--2002阴性(一):B组的鸭只均不死亡。3鸭(鸡)胚接种/中和试验3.1材料准备3.1.11 mL注射器及针头 4套。3.1.2生理盐水：在使用前加人青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000 IU /mL和2000 ug/mL。3.1.3 DHV高免血清。3.1.4鸭(鸡)胚：75枚 12～14日龄的易感健康鸭胚;也可选用 9～10 日龄的无特定病原(SPF)鸡胚。3.2操作方法3.2.1取0.5mL病料样品，加人4.5mL的生理盐水，制备成100倍稀释的待检病毒液。3.2.2选取75 只鸭或鸡胚,分为 A、B和C共三组,每组 25只胚,处理如下：A组（中和试验组）：取2mL高免血清和2 mL的待检病毒液，混合均匀。置于 37℃温箱中作用30min后，每胚经尿囊腔接种0.2mL。B组（接种试验组）:取 2 mL的生理盐水，加人 2 mL待检病毒液，混匀，每只胚经尿囊腔接种0.2 mL.C 组,对照组:每只胚经尿囊腔接种 0.2 mL 的生理盐水。将上述三组接种的鸭（鸡）胚用石蜡或无菌胶布封口后，置于37℃孵化箱内继续孵化，每天照蛋2次，剔除接种后24 h 内 A、B、C三组因细菌污染而死亡的胚