YY_T 0993-2015医疗器械生物学评价 纳米材料：体外细胞毒性试验（MTT试验和LDH试验）.pdf

YY中华人民共和国医药行业标准YY/T0993—2015医疗器械生物学评价纳米材料：体外细胞毒性试验(MTT试验和LDH试验）Biological evaluation of medical devices-—NanomaterialIn vitro cytotoxicity tests (MTT assay and LDH assay)2015-03-02发布2016-01-01实施国家食品药品监督管理总局发布 YY/T 0993—2015目次前言引言-范围规范性引用文件术语、定义和缩略语样品、对照品和试剂制备5细胞系珞养液试验过程数据记录与分析接受准则10结果评定.附录A（资料性附录）试剂、耗材及设备附录B（资料性附录）96孔板加样模板示例参考文献 YY/T 0993—2015许多纳米材料被证实具有一定的细胞毒性，面有丝纳米材料，如纳米银本身具有抗菌杀菌作用，具有较强的细胞毒性。至于试验样品的细胞毒性是否能被预期的临床使用所接受则需要综合分析，或者进一步进行动物试验来综合判断其人体使用时可能的风险。 YY/T 0993—2015附A(资料性附录)试剂、耗材及设备A1试剂A,1.13-(4,5-二甲基-2-唑)-2,5-二苯基-2氢-四氮唑漠盐(MTT)。A,1.,2对乙酰氨基酚（APAP)，A.1,3二甲基亚双(DMSO)，A,1.4甘氨酸(Glycine)。A.1.5氟化销（NaCI)，4.1.6三硝基甲苯X-100（Triton-X-100)。A,1.7细胞培养液（MEM)。A.1.8胎牛血清(FBS)，A.1.9LDH-细胞毒性检测试剂盒。A.1.10磷酸盐缓冲液(PBS)，A.1.11双抗(PS),A.2耗材A.2.196孔平底细胞培养板，A.2.2细胞冻存管。A.2.3培养瓶。A.3设备A.3.1微孔板分光光度计（酶标仪）。A,3.2可放置96孔板的离心机。A.3.3CO：细胞培养箱，A.3.4恒温水溶相。A.3.5例置显微镜。4.3.6可放置96孔板的震播器，A,3.7加样器。 YY/T 0993—2015附录B（资料性附录）96孔板加样模板示例96孔板加样模板示例见表B.1。表 B.196孔板加样模板示例序号686101112APBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSBPBSBlankNM1NM2NM3NM4NM5NM6APAPTriton-X-100NCPEScPBSBlankNM1NM2NM3NM4NM5NM6APAPTriton-X-100NCPBSDPBSBlankNM1NM2NM3NM4NM5NM6APAPTriton-X-100NCPBSEPBSBlankNM1NM2NM3NM4NM5NM6APAPTriton-X-100NCPBSPBSBlankNM1NM2NM3NM4NM5NM6APAPTriton-X-100NCPBSBlankNM1NM2NM3NM4NM5NM6APAPTriton-X-100NCGPBSno-no-no-no-no-no-no-No-cellno-PBSoellcellcellcellcellcellcellcellcellHPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS注；NM表示纳来材料；NC表示明性对照；Blank表示空白对照；PBS表示空自孔 YY/T 0993—2015参文献[1]GB/T19619—2004纳米材料术语[2]ASTM E2526—2008; Standard test method for evaluation of cytotoxicity of nanoparticulatematerials in porcine kidney cells and human hepatocarcinoma cells[3]ASTM F1903-98; Standard Practice for Testing for Biological Responses to Particlesin Vitro[4]NCL GTA-2; Hep G2 Hepatocareinoma Cytotoxicity Assay (http://ncl, cancer, gov/working_assay-cascade,asp)[5]NCL GTA-1: LLC-PK1 Kidney Cytotoxicity Assay(http://ncl,/working_assaycascade,asp)[6]Alley, et al, (1988) Cancer Res, 48;589-601[7]Decker, T. Lohmann-Matthes, M,L, (1988) J. Immunol Methods 15