CJ 148-2001城市供水 粪性链球菌的测定 1、发酵法 2、滤膜法.pdf

CJ/T 148--2001前言本标准由建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。本标准由国家城市供水水质监测网北京监测站负责起草。本标准起草人：徐欣、金红。本标准参加验证单位：上海监测站、武汉监测站、天津监测站、广州监测站、深圳监测站及顺德监测站（省级）。45 中华人民共和国城镇建设行业标准城市供水粪性链球菌的测定CJ/T 148 -- 2001Urban water supply-Detection and enumeration of fecal streptococcus1.发醇法1. Method by enrichment in liquid medium1 范围本标准规定了用发酵法测定城市供水及其水源水中的粪性链球菌。本标准适用于城市供水及其水源水中粪性链球菌的测定。2 方法将水样接种于含叠氮化钠的葡萄糖液态培养基中，叠氮化钠可抑制一般革兰氏阴性细菌的生长，能在此种培养液中生长的菌体可认为是粪性链球菌推测试验阳性。取推测试验为阳性的培养液移至Pfrizer培养基上做确信试验，能在Pfrizer培养基上有棕色晕轮的棕黑色菌落生成，则表示粪性链球菌的证实试验为阳性。3 试剂和材料3. 1叠氮化物葡萄糖液态培养基3.1.1成分（单强度）牛肉膏4.5g胰陈或聚陈15 g叠氮化钠0.2 g葡萄糖7.5 g氯化钠7.5 g蒸馏水1 L3.1.2制法将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH值使其灭菌后为7.2士0.1，分装于试管内，高压灭菌器121C灭菌15min。上述各成分取2倍量为双倍强度培养基。3.2Pfrizer 选择性肠球菌琼脂培养基3.2.1成分蛋白陈20. 0 g酵母膏5.0 g3号胆盐10.0 g氯化钠5.0 g中华人民共和国建设部2001-07-17批准2001-12-01实施46 CJ/T 148—2001柠檬酸钠1.0g七叶苷1.0 g柠檬酸铁铵0.5 g叠氮化钠0. 25 g15.0 g琼脂蒸馏水1 L3.2.2制法将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH值使其灭菌后为7.2士0.1，分装于试管内，121℃灭菌15 min.4仪器4.1 试管:18 mmX180 mm.4.2刻度吸管:1 mL、10 mL。4.3恒温培养箱。4.4高压蒸气灭菌器。4.5酒精灯。4. 6 量简。4.7 培养皿。4.8 冰箱。5 测定步骤5.1 推测试验5. 1. 1 接种不同量的被检水样于二组叠氮化物葡萄糖液态培养基中;接种 1 mL或更少的水样于单倍强度的液态培养基 10 mL 中,接种 10 mL 的水样于双倍强度的液态培养基 10 mL 中,接种量的多少与数目应依水样的特性而有所变化,接种量一般为 1 mL的十进倍数。5.1.2接种过的试管应在 35℃土0.5℃的恒温培养箱内培养,24 h士2 h后检查每一支试管是否有浑浊，如果浑浊不明显，应继续培养到 48 h土3 h后进行检查。5.2确信试验经过24h或48h培养而显示浑浊的所有的叠氮化物葡萄糖液态培养基试管要进一步做确信试验。从推测试验为阳性的试管内取一些培养液,划线转移到培养血中,其内盛有 pfrizer 选择性肠球菌琼脂培养基（3.2），培养血在35℃士0.5℃倒置培养24h土2h，具有棕色晕轮的棕黑色菌落生成则显示粪性链球菌确实存在。6 最大可能数(MPN 值)的计算及记录根据确信试验的阳性管数查最可能数（MPN)表（见表1),即可得100 mL水样中的粪链球菌的最可能数。对表中未被列人的组合，以及当试管数和稀释情况不同时，可用简单公式(1)计算：阳性试管数 × 100MPN/100 mL :.(1)√阳性试管中的水样毫升数×全部试管中的水样毫升数47 CJ/T 148 -- 2001表1最可能数(MPN)表(接5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，不同阳性及阴性情况下100mL水样中细菌数的最可能数和95%可信限值）出现阳性份数每100 mL95%可信限值出现阳性份数每100 mL95%可信限值水样中0.1 mL水样中10 mL1 mL.细菌的10 mL1 mL0.1 mL下限「上限细菌的下限管上限管最可能数管管管最可能数0002421269780012Λ0.57430279800102Λ0.5743111660204Λ0.51144034129310020.575002377010s01150134118911040.51150243151101116A0.51551011931206A0.51551146161202005A0.513512632115020171175z0491713021011752170170211221522#6232202209221079251902m0123285