DB37_T 3122-2018槐花多糖提取工艺及其生物活性评价技术规程.pdf

ICS 67. 050X 04DB37山 東东省地國方标准DB37/T3122—2018槐花多糖提取工艺及其生物活性评价技术规程Technical Guideline of Sophora japonica Polysaccharide Extraction and ItsBiological Activity Evaluation2018-02-02发布2018-03-02实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 3122—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准由山东农业大学、山东省动物疫病预防与控制中心负责起草，本标准主要起草人：朱瑞良、魏凯、胡莉萍、孙振红、黄河、郝智慧、闫振贵、王慧军、裴宗飞I DB37/T 3122——2018槐花多糖提取工艺及其生物活性评价技术规程1范围本规程规定了槐花多糖提取工艺及其生物活性评价技术的术语和定义、试剂或材料、仪器设备、槐花多糖的提取、苯酚-硫酸法测定多糖含量和生物活性评价等标准，本规程适用于槐花多糖用作动物用免疫佐剂和免疫增强剂的制备和检验，规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB/T 603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 14925实验动物环境及设施GB/T 14926. 54实验动物血凝抑制试验3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1分泌型免疫球蛋白ASecretory Immunoglobulin A, S1gAsIgA主要分布在睡液、泪液、肠胃液、乳汁以及呼吸道分泌液。在外分泌液当中，是机体黏膜免疫当中的主要抗体，在肠道黏膜免疫当中起到关键作用的是分泌型免疫球蛋白A（SecretoryImmunoglobulinA，SIgA），作为肠粘膜上的主要免疫球蛋白，它是肠道黏膜上的第一道防线，对各种内源共生菌及外源入侵的病原体都有抵抗作用。3. 2血凝与血凝抑制试验hemagglutination and hemagglutination inhibition test血凝试验（hemagglutinationtest，HA）是指某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验。血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest，HI）是指当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为血凝抑制，利用这种特性设计的试验称血凝抑制试验，3. 3酶联免疫吸附实验enzyme1inked immunosorbent assay, ELISA1 DB37/T 3122—2018将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。t试剂或材料4.1牛血清白蛋白（BSA），配制方法见附录A。4. 21%鸡红细胞：配制方法见附录A。4. 3纤维素酶。4. 4（）4. 5无水乙醇。4. 6商品化新城疫灭活疫苗。4. 7商品化新城疫标准抗原。4. 8磷酸盐缓冲溶液（PBS），配制方法见附录A4. 9去离子水。4. 10生理盐水.4. 1196孔V形微量血凝板4. 1296孔ELISA酶标板。4.13鸡sIgA ELISA检测试剂盒。4. 14抗凝管。4. 15注射器。4. 16密封装。4. 17浓硫酸。4.18苯酚。仪器设备5. 1恒温干燥箱。5. 2超微粉碎机。5.340目筛网。5.4电子天平。5.5pH 计。5. 6水浴锅。5. 7旋转蒸发仪。5. 8全自动血细胞分析仪。5. 9分光光度计。5. 10酶标仪。5. 11磁力搅拌器。5.12移液器（10 μlL~1000 μL）5.13微量振荡器。5.14高压蒸汽灭菌器。5. 15蒸馏装置.5.16分光光度计（380 nm~~780 nm) .5. 17电子天平。5. 18坐标纸。2 DB37/T 3122——20186槐花多糖的提取6.1采集新鲜盛开的槐花，去梗后放入恒温干燥箱中于70℃烘干，用超微粉碎机粉碎成粉末状，过40目筛，装入密封袋，-20C保存。6.2称取一定量的槐花粉与去离子水按体积1:25混合，用pH计调节pH至4.5，加入终浓度0.25%的纤维素酶，45℃水浴中漫提1h，提取4次，合并4次上清液，用旋转蒸发仪减压浓缩至1/5体积。6.3浓缩液用Sevag试剂（