第五章透射电子显微镜生物样品制备技术演示文稿.pptVIP

B、倒口包埋法：本方法适用于单细胞、单层培养细胞和单个微小动、植物体的包埋。操作方法是将浸透好的材料放在一载玻片或盖玻片上，将包埋胶囊内加满包埋剂，放入标签后，倒扣在有样品的位置上，把它们一起放入聚合仪或恒温培养箱内进行聚合，聚合结束后用低温冷冻的办法去掉载玻片或盖玻片。 C、二次包埋法：这种包埋方法只是在彌补上一次聚合后样品制备的不足时使用的一种方法。一般是样品的切片性能不好时，把有样品的部位切下，再放入包埋容器内加满新的包埋剂，再进行聚合，以彌补上次的制样的不足。有时也用于较大的单个细胞的二次包埋。 当前第30页\共有53页\编于星期五\22点 （3）、包埋时的注意事项 A、包埋的容器一定要干燥。 B、所有药品要注意防潮，最好存放在干燥器 中。 C、配制包埋剂时，每加一种药品要充分搅拌 均匀后，在加另一种药品。 D、配好的包埋剂不能有气泡。 E、聚合好的包埋块要存放在干燥器中，以防 止受潮。 当前第31页\共有53页\编于星期五\22点 五、超薄切片 包埋聚合结束，组织和包埋剂成为一体的、具有一定硬度的包埋块了。在进行超薄切片之前，还需完成包埋块的修整、在支持铜网上做上支持膜、制作玻璃刀等工作。 1、包埋块的修整：包埋块的修正有人工修块方法和机械修块法。人工修块，是用单面刀片对包埋块进行修整，一般操作熟练的技术人员，都是用这种方法。 机械修块法是用修块机修块，这种方法修出的包埋块形状规则，但修快速度很慢，熟练者一般不用。不管采用哪种方法，修正好的包埋块的形状应如下图所示： 当前第32页\共有53页\编于星期五\22点 修块机 当前第33页\共有53页\编于星期五\22点 当前第34页\共有53页\编于星期五\22点 2、支持膜的制备 （1）、铜网的选择及清洗：超薄切片必须捞在特制的金属载网（其作用如同石蜡切片的载玻片）上，才能在电镜下观察。电镜使用的载网，根据制作材料的不同有多种。如尼龙网、铜网、镍网等，它们的大小都是相同的，一般直径为3毫米。各种材质的载网根据在上面存有的网眼的多少不同，可分为单孔、双孔、多孔、100目、 200目、300目…… 1000目。在生物样品 制备中经常用的载网 是200目铜网。 当前第35页\共有53页\编于星期五\22点 A、铜网的清洗：新铜网在使用前先用丙酮浸泡，再用酒精洗几次，然后放在铺有干净滤纸的培养皿中干燥备用。 一些使用过的旧铜网，先在二氯乙烷中浸泡30分钟，然后用超声波清洗器处理2～5分钟，再用二氯乙烷洗几次，换酒精再超声洗一次，用无水酒精洗2次，放培养皿中干燥。 B、支持膜的制作：在干净的载网上覆盖上一层薄膜，用以支持所要观察的切片，这层膜就叫支持膜。支持膜的厚度一般为20nm. 支持膜有碳膜、火棉胶膜和Formva（聚乙烯醇缩甲醛）膜，最 常用的是Formvar膜。 当前第36页\共有53页\编于星期五\22点 Formvar膜的制作方法：先配制0.2％～0.5％的Formvar二氯乙烷（或氯仿）溶液。取一直径8cm的结晶皿（或培养皿）盛满蒸馏水，把一干净光滑的载玻片（或制刀用的玻璃条）浸入上述溶液中，然后垂直提出，放置在干燥（相对湿度不能高于30％）的地方，干燥后载玻片上就结有一层薄膜。用锋利的刀片在载玻片的边缘将膜划破。然后将带膜的玻片的前端与水面呈45度角与结晶皿中的水接触，并慢慢向水中压玻片，这时由于水的张力作用，膜会逐渐脱离玻片漂于水的表面，取出玻片。将干净的铜网有光泽的一面向着漂在水面上的膜，均匀的摆放在膜上，然后用一与膜等宽的擦镜纸，平整的放在带有铜网的模上，等水完全湿透纸，用镊子将纸提出，带有支持膜的铜网就沾在纸上。将有铜网面向上放在干净的培养皿中干燥备用。 具体过程见下图示： 当前第37页\共有53页\编于星期五\22点 当前第38页\共有53页\编于星期五\22点 第五章透射电子显微镜生物样品制备技术演示文稿 当前第1页\共有53页\编于星期五\22点 优选第五章透射电子显微镜生物样品制备技术 当前第2页\共有53页\编于星期五\22点 第一节 透射电子显微镜 生物样品的 超薄切片制备技术 当前第3页\共有53页\编于星期五\22点 透射电镜的样品制备技术，主要有超薄切片技术、负染色技术和冷冻蚀刻复型技术。 超