金黄色葡萄球菌检验与计数.ppt

典型菌落计数与计算公式的应用 计数范围要求：选择合计菌落数在20~200的平板，计数典型菌落。 第三十页，共四十六页，2022年，8月28日 公式一的使用范围： ---最低稀释度平板的菌落小于20 cfu，计数该稀释度平板上的典型菌落； ---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，但上一稀释度平板上没有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落； ---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落，其平板上的菌落数不在20 cfu～200 cfu之间，计数该稀释度平板上的典型菌落； 第三十一页，共四十六页，2022年，8月28日 公式一 T=AB/Cd T:样品中金黄色葡萄球菌落数； A:某一稀释度典型菌落的总数 ； B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 ； C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数； d:某一稀释度。 第三十二页，共四十六页，2022年，8月28日 公式应用例一 公式一： T=AB/Cd T=65×4÷5÷0.1=520 样品稀释度 10－1 10－2 典型菌落数 66，64 6，6 用于做血浆凝固酶菌落数 5 5 血浆凝固酶阳性菌落数 4 4 高、低稀释度平板均有典型菌落，但其中高稀释度二平板的菌落数均不在20~200之间，选择低稀释度的平板进行计数。 第三十三页，共四十六页，2022年，8月28日 第一页，共四十六页，2022年，8月28日 概况 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，从人体上可检出12个种。 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。 第二页，共四十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌的生物学特性 形态与染色： 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～1.2μm，大小不一，平均直径约为0.8μm。 革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、无芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。 第三页，共四十六页，2022年，8月28日 培养特性： 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧。 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。 第四页，共四十六页，2022年，8月28日 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶血。 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。 第五页，共四十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌的酶 金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。 血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。否则为无致病力的菌株。血浆凝固酶对热稳定，能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大部分活性。 耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球菌致病力的指标之一。该酶的最适pH为9.0。 第六页，共四十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。 肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。 金黄色葡萄球菌的肠毒素 第七页，共四十六页，2022年，8月28日 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般烹调温度不能将其破坏。218~248 ℃的油中需30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E 5 个型。A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占50%左右。其他依次为D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。 第八页，共四十六页，2022年，8月28日 A型肠毒素毒力较强，摄入1μg即可引起中毒；B型毒力较弱摄入25μg，才引起中毒。一般认为引起人中毒的最小剂量是1.0~7.2μg/kg。 第九页，共四十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌检验 第