淋病奈瑟菌的耐药性及分子流行病学观察.pdfVIP

淋病奈瑟菌的耐药性及分子流行病学观察 淋病是由淋病奈瑟菌( 淋球菌) 引起的性传播 疾病，在世界范围内广泛流行，每年新发感染患者达 到 1. 06 亿，已严重影响人类的公共卫生安全。在我 国，淋球菌的治疗主要以广谱头孢菌素为主，如头 孢曲松、头孢克肟 ［1 ］。近年来，随着抗菌药物的广泛使用，已经出现了对头孢菌素敏感性下降的 淋球菌， 甚至出现了头孢菌素治疗失败的临床病例报 道［2-3 ］。各国研究人员均在寻找有效的抗菌 疗法， 如联合疗法、替代药物、新药研发等。然而控制感染 的蔓延更是重中之重，不同地区感染淋 球菌的型别 有所差异，NG-MAST 分型是基于测序技术的淋球菌 基因分型方法，通过具有高度变异 性的 porB 基因 ( 编码孔蛋白) 和 tbpB 基因( 编码转铁结合蛋白) 测 序分析并与数据库比对后得 到基因型，对于了解区 域感染淋球菌的分子流行特征及预防控制有一定的 意义。因此，本研究对本 区域分离的淋球菌进行耐 药性分析及分子分型，报告如下。 1 材料与方法 1. 1 菌株收集 126 株淋球菌分离自2015 －2016 年浙江萧山医院就诊的泌尿生殖道感染患者，男 性 标本采自尿道分泌物，女性标本采自宫颈分泌物，剔 除同一患者中分离的重复菌株。所有菌株经 过革兰 染色镜检、氧化酶试验以及 API NH 鉴定试剂条( 法 国 Bio-Merieux 公司) 鉴定为淋球菌， 菌株保存于 20%甘油肉汤，置 －80℃ 冰箱备用; 质控菌株 ATCC49226 由浙江大学医学院 Stijn 教授惠赠。 1. 2 仪器和试剂 GeneAmp PC ＲSystem 9600 为 美国 ABI 公司产品( Applied Biosystems) ， EPS-100 电泳仪为上海天能科技有限公司产品，UV-3B 紫外 成像仪为珠海黑马医学仪器有限公司产 品; Premix Taq Version 2. 0 及 DNA Marker 购自宝生物工程( 大 连) 有限公司。引物合成及 PC Ｒ 扩增产物测序均由 上海生物工程有限公司完成。 1. 3 PPNG 检测 头孢噻吩纸片法检测 PPNG ，根据颜色的改变判断结果。 1. 4 药物敏感试验 琼脂稀释法检测淋球菌对青 霉素、四环素、大观霉素、环丙沙星、头孢曲松、头 孢 克肟、阿奇霉素的最小抑菌浓度( MIC) ，按照EUCAST 标准( http: / /www. eucast. org) 判断抗 菌药物 敏感性，阿奇霉素 MIC≥256mg/L 被判定为高水平 耐药( AZ-HL Ｒ) ［4 ］。 1. 5 DNA 提取 取 GC 培养基上纯培养的单个菌 落数个，混悬于 100μL 的无菌去离子水中，离心 取 沉淀加入50μL 裂解液，100℃煮沸15min ，冷却后以14 000r/min 离心5min ，取上清即为PC Ｒ扩增模板， －70℃保存备用。 1. 6 淋球菌多抗原序列分型( NG-MAST) 参照文 献报道［5 ］的方法，PC Ｒ扩增 PO Ｒ和 TBPB 基 因并测 序，然后将测序结果上传至 NG-MAST 数据库( http: / /www. ng-mast. net) ，比对获取菌株 的 ST。 2 结果 2. 1 菌株分布 共收集 126 株淋球菌，其中男性感 染者82 例，女性感染者 44 例，男女比例为 1. 86 ∶ 1; 年龄范围3 ～70 岁，平均( 33. 1 ±12. 8) 岁。 2. 2 PPNG 检测 126 株淋球菌中，检出 PPNG 菌 株72 株，总阳性率为 57. 14% ( 72/126) ，2015 年和 2016 年 PPNG 阳性率分别为64. 72%和48. 34%。 2. 3 药物敏感试验 126 株淋球菌对青霉素和四 环素耐药率较高( ＞65%) ，对阿奇霉素的耐药率较 低( ＜22%) ，未发现环丙沙星敏感的菌株和大观霉素、头孢曲松、头孢克肟耐药的菌株( 表 1) 。三 重耐 药( 青霉素、四环素、环丙沙星) 淋球菌比例为 59. 52%( 75/126mg/L) ，所有阿奇霉素耐药菌 株均 对青霉素、四环素、环丙沙星耐药，其中 AZ-HL Ｒ( MIC≥256mg/L) 菌株22 株，占17. 46%。 2. 4 菌株 NG-MAST 分型 126 株淋球菌分为 82 种不同的 STs 型别，其中 45 个为新发