新冠病毒核酸检测实验室存在问题及解决对策（肖艳群）.pptxVIP

新冠病毒核酸检测实验室存在问题及解决对策上海市临床检验中心 肖艳群2022.1.25 新冠病毒核酸检测相关技术规范u国家- 医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）联防联控机制医疗发〔2020〕313号- 新冠病毒肺炎防控方案（第八版）附件10《新冠病毒样本采集和检测技术指南》联防联控机制医疗发〔2021〕51号u上海- 上海市医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测质量管理规范- 关于提升新冠病毒核酸检测质量的要求- 关于进一步加强本市新冠病毒核酸检测工作管理的通知（沪卫医便函[2021]10号） 上海开展新冠病毒核酸检测医疗机构分布（截止2021.12.31）医疗机构分类三级医院数量（家）5742445二级医院第三方检测机构其它医疗机构疾控机构171653合计 2021年各医疗机构不符合项数量趋势图4 问 题1-检测人员操作不规范üüüü移液器吸液后未丢弃枪头而平放移液器使用后的吸头洒落，并未及时处理丢弃Tip头时移液器接触其他废弃物分装好反应液的八联管均未封盖而较长时间放于二区生物安全柜内ü核酸提取物未及时封盖ü阳性质控品稀释未在生物安全柜内操作ü、6 u加强人员培训u严格执行各个区域的操作规程核酸检测规范操作ü试剂储存和准备区：贮存试剂制备、试剂分装和扩增反应混合液制备，消耗品贮存和准备。ü标本制备区：转运桶开启，核酸提取及其加入至扩增反应管等。打开标本采集管加样及核酸加至PCR扩增反应体系中必须在生物安全柜内完成。产生气溶胶的操作尽量在生物安全柜内完成。混采样本应充分混匀。核酸提取完成后，立即将提取物封盖处理。ü扩增和产物分析区：核酸扩增和产物分析。扩增完成后反应管不可开盖，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不可高压，按 一般医疗废物转移出实验室处理。 问 题2-室内质控设置及操作不规范üüüü室内质控品浓度过高未随机放置粉色为弱阳性质控，室内质控浓度较高部分批次不参与核酸提取失控未及时分析原因 u常规检测室内质控要求? 每板检测2份弱阳性质控品（第三方）、3份阴性质控品? 随机放在临床标本中，参与从提取到扩增全过程? 弱阳性质控品浓度宜为检测限的1.5-3倍u快检? 每次开机均以弱阳性及阴性质控品质控 、连续检测标本数达到50个或开机达到24小时后，弱阳性质控品再次质控? 阴性质控：生理盐水? 弱阳性质控：第三方，浓度宜为检测限的1.5-3倍 问 题3-结果分析流程不规范灰区样本结果处理流程不规范ü选择“自动”模式设置阈值线，存在漏检风险ü 问 题4-可疑样本结果复检流程不规范uu初检和复检均使用同一试剂品牌，未按照规定采用另一种试剂进行复检复检使用初检提取的核酸，未按照要求采用原始样本进行复检11 结果处理及复检要求结果判读及处理：严格按照试剂说明书要求执行uu 阳性结果复检。一旦出现阳性结果，需采用另外一到两种更为灵敏且扩增不同区域的核酸检测试剂对原始标本进行复检，复核阳性方可报出。可疑阳性样本结果分析ü 疫苗接种点污染？ü 阳性质控品污染？ü 真阳性？ 问 题5-摄像设施安装不到位uu安装位置不能清楚录制加样等关键过程无法调取监控录像 注意事项1-采样uuuu采样点及采样时机标本类型：集中隔离人员采集鼻咽拭子采样管选择：20合 1、 10合 1、 5合 1、 单采物表：避免2次消毒14 注意事项2-检测系统选择uü常规检测系统提取仪和扩增仪要求。核酸提取试剂应与核酸提取仪配套使用，选用扩增检测试剂盒指定的核酸提取试剂和扩增仪ü试剂要求。试剂要与检测仪器相匹配。选用至少包含针对新冠病毒ORF1ab和N基因区域的试剂，检测限≤500拷贝/mL。uü快检系统相对于常规的2019-nCoV核酸检测，样本检测全过程所需时间明显缩短，且仪器小型化（部分检测系统实现便携式），具有或不具有核酸提取、扩增检测一体化的特点。ü快检试剂+ABI7500 扩增仪不属于快检系统15 注意事项3-接收集中隔离点样本检测实验室??对集中隔离人员，要通过鼻咽拭子采集上呼吸道标本选择检测限≤500拷贝/ml的试剂。原则上，提取试剂、提取仪、扩增试剂和扩增仪应当配套使用，并在检测前进行性能验证??鼓励在两个以上检测机构通过不同设备和试剂，对集中隔离人员的样本进行平行检测，进一步提高检测结果的准确性入境人员要采用检测限≤500拷贝/ml和双靶区域以上的试剂进行检测，以降低因试剂灵敏度不足或病毒变异可能造成的漏检风险16 注意事项4-核酸检测安全管理uuuu标本安全管理实验室检测安全管理核酸提取和检测安全要求实验结束后清洁要求17 实验室清洁生物安全柜实验室空气转运容器工作台面、地面核酸提取仪每次检测完每 天 试 验 后 使 用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行台面、地面清洁。垃圾桶及垃圾袋应喷洒0.2%含氯消毒剂每 天 试 验 后用 75%酒 精对