山乌桕蜜改善小鼠酒精肝损伤及肠道菌群的作用和机制.pdfVIP

摘要 摘 要 山乌桕 （Triadica cochinchinensis ）是大戟科 （Euphorbiaceae ）乌桕属 （Triadica）植物。植株为乔木或大灌木，在我国南方诸省如江西、云南、四川、 贵州、湖南和福建广泛分布。该植物具有重要的药用价值，同时也是重要的蜜 源植物，具有重要的经济价值。由于山乌桕花泌蜜量大且稳定，山乌桕蜜 （Triadica cochinchinensis honey, TCH ）是蜂农重要的单花蜜收成，但目前缺乏 TCH 化学组成和生物活性方面的研究基础。本论文采用超高效液相色谱- 四极杆 飞行时间串联质谱法 （UPLC-Q-TOF/MS ）对 TCH 的化学组成进行了全面分析； 通过小鼠喂养等体内实验考察了TCH 对小鼠酒精肝损伤（ALD ）的保护作用及 机制以及对小鼠肠道菌群的影响。论文研究取得了一系列的创新性成果，为新 型保健食品的研发和山乌桕蜜的深度利用提供了科学依据。 本文以TCH 为研究对象，使用UPLC-Q-TOF/MS 检测了TCH 的化学组成。 并将雄性C57BL/6J 小鼠随机分为7 组，分别为空白对照组（PF 组）、酒精模型 组（AF 组）、阳性对照组（PC 组）、低浓度 TCH 组（LH 组）、中浓度 TCH 组 （MH 组）、高浓度 TCH 组（HH 组）和果葡糖浆组（FG 组），处理 12 周后， 收集小鼠肝组织、结肠内容物和血清。采用生化试剂盒检测小鼠血清的谷丙转 氨酶（ALT ）和谷草转氨酶（AST）活力，采用苏木精伊红 （HE ）染色和油红 染色评估小鼠 ALD 程度，采用蛋白质分子印迹法（WB ）和酶联免疫吸附测定 法（ELISA ）评估小鼠肝脏炎症水平；通过对小鼠肠道菌群16S rDNA 基因进行 Miseq 测序，进行肠道菌群物种组成分析及与其他指标的相关性分析，并用气 相色谱-质谱联用技术（GC-MS ）检测小鼠结肠内容物中短链脂肪酸（SCFAs ） 的浓度来评估TCH 对小鼠肠道菌群的影响。本文系统地研究了 TCH 对酒精诱 导小鼠肝损伤的保护作用及机制，以及TCH 对酒精致使肠道菌群失衡的调节作 用，主要研究结果如下。 （1）TCH 中N1,N5,N10‑(E)三香豆酰亚精胺含量高达 13599.44 μg/kg ，是 TCH 的标志性化合物。TCH 中含有丰富的鞣花酸、没食子酸、水杨酸等酚酸化 合物，含量分别是791.18、126.58、73.21 μg/kg ；也含有柚皮素、芦丁、槲皮素 等黄酮类化合物，含量分别是159.55、109.09、95.51 μg/kg 。 I 摘要 （2 ）酒精导致小鼠血清ALT 及AST 水平显著增加，PC 组和LH 组降低了 两种指标，接近PF 组；MH 组和HH 组降低了ALT 水平，没有降低AST 水平； FG 组的ALT 和AST 均高于HH 组，且AST 浓度高于AF 组。AF 组出现肝组织 脂肪变性，PC 组和LH 组有改善效果，MH 和 HH 组也具有一定的缓解作用， FG 组则加重了脂肪变性程度，造成了更严重的肝损伤。 （3 ）酒精提高了小鼠肝组织的NFκB 蛋白水平，同时也增加了TNF-α、IL- 1β、IL-6，即激活了 NFκB 信号通路，TCH 降低了以上的蛋白水平，抑制了 NFκB 信号通路。PC 组则升高了NFκB 蛋白水平，TNF-α、IL-1β、IL-6 降低效 果差于LH 组，即TCH 抑制炎症效果比水飞蓟素好。 （4 ）从门水平来看，酒精导致小鼠的拟杆菌门丰度降低，厚壁菌门、变 形菌门和放线菌门丰度升高，并提高了F/B 值。LH 组升高了拟杆菌门丰度，降 低了厚壁菌门、变形菌门和放线菌门丰度，接近PF 组小鼠肠道菌群的物种组成。 从科水平来看，酒精导致Muribaculaceae 和Rikenellaceae 等科的丰度显著降低， Erysipelotrichaceae 、Clostridiaceae 和Lachnospiraceae 等科的丰度显著升高，LH 组升高了Muribaculaceae 和Rikenellaceae 等科丰度，降低了Erysipelot