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高速逆流色谱分离纯化抗生素会计学第1页/共44页 内 容 提 要一 高速逆流色谱技术简介 二 溶剂选择 在逆流色谱中的重要性三 高速逆流色谱技术分离纯化抗生素实例第2页/共44页一 高速逆流色谱技术简介高速逆流色谱(High Speed Counter Current Chromatography, HSCCC)a 多层盘绕管；b 平衡物第3页/共44页优缺点（与HPLC等液-固色谱技术比较)优点分离原理不同：互补性强无需固体作固定相 ：不存在固体对样品组分的吸附、玷污、变性、失活、拖尾等现象，能实现很高的回收率，节省昂贵的材料消耗和溶剂消耗（HPLC的1/10以下），运行使用的后续投入较低 溶剂极性可调：无需更换不同极性的色谱柱即可实现流动相从弱极性到强极性或相反的转化 色谱柱无填料，柱内空间全部是有效空间，容积大：样品负载能力强，制备量大，重现性好盘管总体积100mL， 一次分离量：克盘管总体积3000mL，一次分离量：15-60克 第4页/共44页缺点 分离效率（理论塔板数）还不高（1000) N=5.54(tR/W1/2)2一次分离所需时间还较长（以小时计） 基本原理以及溶剂系统选择等还不完善相应的配套检测器还不够完善（溶剂干扰）分离后样品的纯度还需HPLC等方法测定混合溶剂的回收第5页/共44页二 溶剂选择在高速逆流色谱中的重要性分离度Rs: 2(tR2- tR1)/W1+W2提高分离度的方法CCC CPC: (tR2- tR1)?, HPLC: W1+W2?第6页/共44页样品：极性、溶解度、纯度（预处理）溶剂：两相溶剂的体积应尽量相同，挥发性较强 样品+溶剂：沉降时间（30秒)，以得到满意的固定相保留率 分配系数(K):上相中样品浓度/下相中样品浓度 ～2, 1最佳样品各组分间的分离因子(?, 各组分的K值之比) 1.5 溶剂系统：固定相保留率：75% 第7页/共44页表1 最佳溶剂体系选择表极性较弱溶剂 最佳溶剂 极性较强溶剂heptane, CHCl3 THF H2Oheptane, toluene, MiBK, CHCl3, EtOAc ACO H2Oheptane methyl ethyl ketone H2OTHF DMSO H2Otoluene, MtBE, MiBK, EtOAc MeCN H2Oheptane, toluene, CHCl3, EtOAc BuOH H2Oheptane, toluene, CHCl3, EtOAc PrOH H2Oheptane, CHCl3, EtOAc EtOH H2Oheptane, toluene, CHCl3, EtOAc, BuOH MeOH H2Oheptane, toluene, CHCl3, MiBK, EtOAc, BuOH HOAc H2OCHCl3 HCOOH H2O非水体系Heptane THF, DMF, EtOAc, PrOH, EtOH MeOH, MeCN第8页/共44页逆流色谱中常用的几个三元溶剂体系相图 Type 1: Chloroform / Methanol / Water应用：杆菌肽，Niphimycin，克念菌素 ，Herbicidins A, B等第9页/共44页Type 2. Ethyl acetate / butanol /