非小细胞肺癌基因检测.pptVIP

- * - ANNUAL BUSINESS REVIEW 关于非小细胞肺癌基因检测 第1页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 前言 随着分子医学进展和靶向药物的不断涌现，晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的治疗已进入到个体化治疗的时代。 目前临床应用的个体化靶向治疗主要针对EGFR突变型和ALK融合基因型肺癌,这两种基因变异型肺癌均具有明确的分子靶点、靶点检测技术及上市的靶向药物，临床疗效得到明显提高。 第2页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 EGFR突变检测中需要明确的几个基本概念 2、基因突变是指DNA发生碱基序列的改变：须选择有针对性的检测手段，针对非DNA的检测手段如：RT-PCR（检测RNA表达），免疫组化（检测蛋白表达）以及针对非碱基序列的检测手段如：FISH（检测DNA的扩增、缺失、断裂、融合）等，均不适用。 体细胞突变 发生在非种系组织中 不具有遗传性 不会遗传给子代 种系突变 发生于精子或卵子中 可以遗传子代 子代所有细胞均带突变 1、EGFR突变为体细胞突变：发生于肿瘤细胞中，正常细胞（癌旁或白细胞等）不含突变。要尽可能取到足量的肿瘤细胞进行检测，这是保证检测结果可靠的根本前提。 第3页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 EGFR基因突变检测概念 EGFR突变检测指肿瘤组织中编码EGFR基因的DNA突变状态检测 并不是： EGFR基因DNA拷贝数的检测（FISH法） EGFR蛋白表达量的检测（IHC法）。 EGFR检测 检测物质 部位 方法 基因突变 DNA 细胞核 测序法、ARMS法等 拷贝数 DNA 细胞核 荧光原位杂交法（FISH） 蛋白表达 蛋白质 细胞膜 免疫组化法（IHC） RNA表达 RNA 细胞核 RT-PCR X 第4页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 Nature Review 2007, 7:169 NSCLC中EGFR酪氨酸激酶区突变种类 第5页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 第6页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 标本采集及病理评估 DNA 抽提及质控 检测报告 EGFR突变检测 ARMS 测序法 其它方法 EGFR 突变检测流程 第7页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 EGFR突变检测中的相关角色 患者 临床医生 胸外科医师 内镜医师 收集肺癌组织标本 病理科医生 准备样本 实验操作及结果分析 实验室人员 报告结果给临床医生 肿瘤科医生 放疗科医生 呼吸科医生 第8页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 用于EGFR突变检测的标本 肿瘤组织—目前最可靠的标本； 其它样本： 外周血（血浆、血清） 细胞学 （胸水、痰液细胞学） 支气管刮取物 仍需进一步研究确定这些样本在临床实践及诊断中的应用 第9页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 标本问题 石蜡组织：尽可能送检一年内的石蜡标本。 石蜡切片：含肿瘤细胞越多越好（50%以上）；组织部位面积约6mm x 6mm以上； 包埋组织：组织块不小于0.5×0.5×0.5（cm）。? 新鲜组织：比石蜡等处理过的旧组织，DNA保存得更完整，对PCR实验更有利，但一定要经病理学确认。 含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小以上），经PBS或生理盐水冲洗干净。 取癌组织的中心位置组织块（避开坏死区域），固定于10%中性福尔马林溶液中，尽快送病理科。 细胞学标本：可用 原发灶与复发灶：只要能获得足够的癌细胞，均可；但对于复发的患者，再次活检不仅可确诊，还可以获得分子标志物的进一步信息。 第10页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 标本因素对EGFR突变检测的影响 --肿瘤组织特点-- 遗传异质性 对检测方法敏感度有较高要求 正常细胞混杂 第11页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 标本因素对EGFR突变检测的影响 --组织标本种类-- 对检测方法有相应要求，组织标本及DNA质控尤其重要 冰冻新鲜组织 固定包埋组织 --外科手术标本 完整，量多 广泛 --小活检标本 完整，量少 受限 --外科手术标本 片段化，量多 受限 --小活检标本 片段化，量少 极度受限 DNA质与量 适用方法 第12页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期六 图4. EGFR基因检测使用的临床样本及其操作。A.被切成10微米的石蜡包埋标本。B.在支气管镜下将刷检样本放在生理盐水中洗净（悬浮），可以就这样冷冻保存，C.进一步