食品国家安全标准 4789.5-2012志贺氏菌的检验.docxVIP

食品国家安全标准 4789.5-2012志贺氏菌的检验 志贺氏菌属通称痢疾杆菌，革兰氏阴性杆菌，无鞭毛、无动力。不产生荚膜和芽胞。长约2～3um，宽0.5～0.7um 。分为4个群：A群（痢疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。1、增菌培养样品25g加入含新生霉素的250mL志贺氏增菌肉汤中，将此混悬液均质混匀，置于41.5±1℃，16-20h厌氧培养。? 志贺氏菌增菌肉汤? 培养基中除胰蛋白胨、葡萄糖外，加入新生霉素作抑菌剂，并加入少量的吐温80作增溶剂，以帮助样品的充分分散。41℃厌氧培养有助于抑制其它杂菌生长。2、志贺氏菌的分离取增菌后志贺氏菌增菌液划线接种在XLD琼脂平板或者MAC琼脂或者志贺显色培养基上，36±1℃培养20h~24h。如果菌落太小或者不典型，则继续培养到48h再观察。麦康凯琼脂上的51572XLD琼脂上的51572显色培养基平板上的志贺氏菌3、初步生化实验挑取选择性平板上的2个或2个以上典型菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，36±1℃培养20h~24h。凡是三糖铁琼脂斜面产碱、底层产酸、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取用上一步已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行进一步生化和血清学分型。4、进一步生化实验将已培养的营养琼脂生长的菌苔，进行生化实验，即β-半乳糖苷酶，尿素，赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解实验。必要时补充做靛基质，甘露醇，棉子糖，甘油，革兰氏染色以及氧化酶实验。对于生化反应不符合的菌株，即使可以与某种血清凝集，但仍不能判定。因某些不活泼的大肠埃希氏菌的生化与志贺氏菌相似，并可以与血清凝集，所以对前面生化符合志贺氏菌属的培养物外加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验36℃培养24h-48h。5、血清学鉴定志贺氏菌没有动力，所以没有鞭毛抗原。志贺菌属主要有菌体O抗原。宋内志贺氏菌没有K抗原。如生化项目符合志贺氏菌的生化特征，而血清阴性的话，可挑取菌苔制成浓菌液，100℃煮沸15min-60min去除K抗原后再检查。