GB 8538饮用天然矿泉水检验方法 征求意见稿（微生物检验方法）.docxVIP

GB 8538饮用天然矿泉水检验方法 征求意见稿（微生物检验方法） 8月31日下午，国家卫健委发布《食品安全国家标准审评委员会秘书处关于征求食品中污染物限量等16项食品安全国家标准（征求意见稿）意见的函》。其中GB8538征求意见稿对现行矿泉水标准的微生物检测部分做了大量的补充和修正，比如：提及的培养温度和培养时间缺少波动范围，检验方法中列出的设备与材料、培养基和试剂内容与操作步骤中提到的不一致，检测程序图与操作步骤不一致；附录 A：标题与内容不完全对应，培养基 pH 值缺少波动范围， 部分培养基成分错误等问题； 附录 B： 表 B.1 中微生物测定项目有误，且微生物检样采样体积不符合要求。涉及大肠菌群、粪链球菌、铜绿假单胞菌、产气荚膜梭菌4个微生物检测项目。  下面我们把微生物检验各检测项目的修订情况汇总，如下表1/2/3/4： 表1 大肠菌群检验方法序号现行标准在意见稿中修改的内容修改说明多管发酵法1设备材料规格不全或者同具体操作不对应增加无菌试管规格35 mm×200 mm或其他适宜规格、无菌小倒管规格6 mm×30 mm、13 mm×100 mm或其它适宜规格；增加无菌吸管项代替现行无菌定量分装器；增加pH计或pH比色管或精密pH试纸项；删除电子天平、显微镜、电炉项。一般性修订：检验设备更加完善，且适用于具体操作步骤。2矿泉水水源水推测性检测水样量为10mL、1mL、0.1mL各5管。MPN表为总接种量为55.5mL对应的MPN表矿泉水水源水检测修改为15管发酵法，同时修改推测性检测水样量为100mL、10mL、1mL各5管。修改MPN表为总接种量为555mL对应的MPN表。检验方法的重大修订：增加检测水样量，减少由于水样取样量太少导致的结果不具有代表性，使结果更加准确。3直接饮用矿泉水检测方法是5管MPN法，MPN表是5管MPN表直接饮用矿泉水检测方法修改为6管发酵法，在原标准的5管10mL接种量基础上增加1管50mL接种到50mL双料培养基步骤，共6管；修改对应MPN表从5管MPN表修订为6管MPN表。4推测性实验的培养时间为25h，确证性培养时间为48h推测性实验培养时间改为24±2h，确证性实验培养时间改为48±2h。一般性修订：增加温度范围，修改更加合理。5确证实验用到的亮绿乳糖胆盐培养液(BGLB)的装量没有体现明确亮绿乳糖胆盐培养液的装量为10mL。一般性修订：指定装量，检验更明确。滤膜法6设备材料不全无菌滤膜修订为无菌亲水性微孔滤膜；无菌抽滤设备修订为过滤设备；增加培养箱、显微镜、冰箱、pH计项目；培养基增加无菌生理盐水、无菌磷酸盐缓冲液、营养琼脂项。一般性修订：材料设备更加全面，文字描述更加规范。7没有滤膜法检验流程图增加滤膜法检验流程图。一般性修订：检验流程表格化，清晰明白8没有指定稀释液种类明确水样稀释液为无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液。一般性修订：指定具体培养基，检验更明确。9滤膜法确证实验挑取可疑菌落数为3个（不足3个全挑）按比例挑取10个不同形态的可疑菌落（不足10个则全挑）。较大修订：增加确证实验挑菌数，使结果更具代表性。10没有菌落纯培养过程增加可疑菌落在营养琼脂上的纯培养过程。一般性修订：避免选择性平板的菌落会影响生化鉴定结果；同时有助于分离出单菌落，便于下一步鉴定。11计算方法简单计算方法增加确证菌同可疑菌的比值，同时计入稀释因子。较大修订：计算方法更加科学合理。表2 粪链球菌检验序号现行标准在意见稿中修改的内容修改说明1设备材料不全，表述不规范，培养基种类不全无菌滤膜修改为无菌亲水性微孔滤膜，无菌抽滤修订为过滤设备，修改无菌刻度吸管项为无菌吸管，修改无菌培养皿为无菌平皿直径：90mm；删除无菌量筒、无菌试管、高压蒸汽灭菌器、酒精灯项。冰箱温度改为2-8℃；培养基脑-心浸萃液态培养基、脑-心浸萃琼脂培养基修为脑心浸液液态培养基、脑心浸液琼脂培养基；增加无菌生理盐水、无菌磷酸盐缓冲液、革兰氏染色液、3%过氧化氢溶液、胆汁液态培养基。一般性修订：设备材料更加完善，文本表述更规范具体，补充整个实验过程涉及到的培养基。2推测性实验的培养时间为48h推测性实验培养时间改为48±2h。一般性修订：增加温度范围，修改更加合理。3滤膜法确证实验挑取可疑菌落数为不少于5个（不足5个全挑）按比例挑取10个不同形态的可疑菌落（不足10个则全挑）。较大修订：增加确证实验挑菌数，使结果更具代表性。4直接挑取KF平板可疑菌落染色镜检挑取KF平板可疑菌落在脑心浸液琼脂平板后纯培养后再染色镜检。一般性修订：纯培养后的染色镜检结果更可靠，且方便