外搽非光敏中药组方对大鼠表皮cKIT和PAR2蛋白表达的促进作用（职称论文资料）.docVIP

外搽非光敏中药组方对大鼠表皮cKIT和PAR2蛋白表达的促进作用（职称论文资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：外搽非光敏中药组方对大鼠表皮cKIT和PAR2蛋白表达的促进作用 1 1实验材料 2 2实验方法 2 文2：褪黑素对Aβ诱导的大鼠脑组织GFAP和S100β蛋白表达的干预作用 5 1 材料与方法 5 2 结 果 7 3 讨 论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 外搽非光敏中药组方对大鼠表皮cKIT和PAR2蛋白表达的促进作用（职称论文资料） 文1：外搽非光敏中药组方对大鼠表皮cKIT和PAR2蛋白表达的促进作用 近年来各家根据中医理论及现代药理研究，研制出治疗白癜风的新配方。现阶段临床常用的中药复方制剂有复方卡力孜然酊、白灵酊、复方煤焦油酊、复方补骨脂酊、赤菟酊等。纵观其组方以补骨脂、无花果等呋喃香豆素类光敏感中药为主。临床应用取得很好的疗效，但易出现红斑、水疱、色素沉着过度等不良反应，影响美容［1］。本院在以往研究［2-4］的基础上采用非光敏中药组成中药2号，外用治疗白癜风取得了较好的疗效，且无明显不良反应。本实验应用免疫组化的方法，观察中药2号对大鼠表皮黑素细胞数量、干细胞因子受体(C-KIT)和蛋白酶激活受体-2(PAR-2)表达的影响，从而探讨其临床治疗白癜风有效的可能机理。 1实验材料 1．1实验药物中药2号由透骨草、浮萍等组成，中药饮片由浙江中医药大学中药饮片厂张云副主任中药师提供并鉴定。 1．2实验动物健康雄性清洁级SD大鼠3只，体重420～450g，由浙江中医药大学实验动物中心提供。 1．3主要试剂和仪器鼠抗S-100蛋白(北京中杉金桥生物技术有限公司)，即用型；1：100兔抗人c-KIT多克隆抗体和1：100山羊抗人PAR-2多克隆抗体(SANTA CRUZ公司)。二步法抗兔鼠通用型免疫组化检测试剂盒(Dako公司)，SP试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。光学显微镜BX-PMDO(日本奥林巴斯公司)及PAS-9000病理图像分析系统。 2实验方法 2．1中药制备中药2号饮片用75％乙醇室温下密闭浸泡2周，并不时振荡。滤过除渣，收集提取液，制成每毫升相当于0．1g原生药的溶液。 2．2动物给药每只大鼠背部取2个相离的区域，分别外涂中药2号、75％乙醇，每天2次，连续4周。每日涂药前剃毛1次，4周后取大鼠背部皮肤进行免疫组化染色。 2．3免疫组化石蜡切片脱蜡水化、柠檬酸钠缓冲液(PH6．0)微波抗原修复，S100和c-KIT按二步法抗兔／鼠通用型免疫组化检测试剂盒(Dako公司)、PAR-2按SP试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)规定步骤操作。PBS代替一抗作为阴性对照，DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水、透明、封片。 2．4结果判定参照Moretti等［5］的评分标准，S100以表皮基底层细胞膜和／或胞浆出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，以每200个基底细胞为计数单位；c-KIT和PAR-2以表皮层细胞膜和／或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，按阳性染色范围占表皮全层的百分比评估，在400倍视野下，每张组织切片随机选取10个视野观察评定，采用PAS-9000病理图像分析系统，计算阳性表皮占表皮全层的百分比。比较中药2号与75％乙醇作用后上述指标的差别。 2．5统计学处理实验数据以±s表示，两组间差异用配对t检验。采用SPSS14．0统计分析软件，显著性检验水平α=0．05。 3结果 S100阳性细胞位于表皮基底层，中药2号作用后与75％乙醇相比，差异无显著性(P0．05)(图1)。c-KIT阳性细胞主要位于基底层和棘层，以细胞膜着色为主，呈棕黄至棕褐色，中药2号作用后阳性染色范围明显高于75％乙醇(P0．05)(图2)。PAR-2阳性染色集中于颗粒层，呈棕褐色，线状分布，中药2号作用后阳性染色范围亦高于75％乙醇(P0．05)(图3)。统计分析见表1。 4讨论 中医学认为白癜风病机有三：其一，风湿之邪搏于肌肤，气血失畅，血不荣肤；其二，因情志损伤或因白癜风致情志抑郁，肝失调畅，气血失和，肌肤失养；其三，由于本病持续时间长，久病伤损，致肝肾亏虚。陈梅花等［6］总结50年来186首中药外用治疗白癜风的处方，发现治疗原则主要集中于：祛风燥湿、滋补肝肾、活血化瘀。以往研究发现，旱莲草、女贞子等多种非光敏中药具有不同程度的促进酪氨酸酶活性、黑素生成及促进黑素细胞迁移的作用［2-3，7-8］。透骨草、浮萍处理过的HaCaT上清液能明显提高B10br酪氨酸酶活性［4］。笔者以祛风燥湿、辅以滋补肝肾为治则，取透骨草、浮萍等非光敏中药组成中药2号，临床取得较好的