糖链的序列测定高碘酸氧化法及Smith降解法.docxVIP

糖链的序列测定_高碘酸氧化法及 Smith 降解法 () 高碘酸氧化和 Smith 降解 高碘酸可选择性断裂糖分子中的邻二羟基或邻三羟基处,生成相应的多糖醛,甲 醛或甲酸.反应定量进行,每开裂 1 个 C—C 键消耗 1 分子高碘酸.通过测定高碘酸的 消耗量及甲酸的释放量,可以判断糖苷键的位置,直链多糖的聚合度,分支多糖的分 支数等.Smith 降解是将高碘酸氧化产物还原后酸水解,再鉴定水解产物,从而推断 糖苷键的位置不分支点等.以葡萄糖为例,以 1—2 或 1 —4 位键合的糖基经高碘酸 氧化,平均每个糖基消耗 1 分子高碘酸,且无甲酸释放;1—3 位键合的糖基不被高碘 酸氧化;1—6 位键合的糖基或非还原末端糖基经高碘酸氧化,消耗 2 分子高碘酸同 时释放 1 分子甲酸. 【实验原理】 高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处,生成相应的 多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行,每开裂—个 C-C 键消耗一分子高碘酸。通 过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量,可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、 多糖的分枝数目和取代情况等。 【实验材料】 1. 实验器材 紫外分光光度计。 2. 实验试剂 (1)溴甲酚蓝指示剂:0.1 克溴甲酚蓝溶于 250ml 蒸馏水中，含 1.43 毫升 0.1mol/L 氢氧化钠，。 (2) 30mmol/L 高碘酸钠溶液。 高碘酸钠 基本信息 中文名称:高碘酸钠 英文名称:Sodium periodate 中文别名:过碘酸钠;偏高碘酸钠 英文别名:Sodium Metaperiodate; Sodium Metapriodate; Sodium (Meta)Periodate; Sodium Tetroxoiodate(Vii); Sodium meta periodate CAS:7790-28-5[1] 1 EINECS:232-197-6 分子式:NaIO4 分子量:213.8918 高碘酸 简介 中文名称: 高碘酸 英文名称: periodic acid 正高碘酸 英文别名:pentahydroxy-lambda~5~-iodane oxide[1] CAS No.: 10450-60-9 2 分子式: H5IO6 分子量: 227.94 理化特性: 主要成分: 纯品 外观不性状: 无色或白色结晶,无臭,有潮解性。 熔点(?): 122 沸点(?): 140(分解) 相对蒸气密度(空气=1): 7.9 溶解性: 溶于水、乙醇,微溶于乙醚。 主要用途: 用作氧化剂。 高碘酸钠制备: 氯气氧化法 将碘在水介质中,通入氯气进行氧化生成高碘酸,经分离杂质后,加 入氢氧化钠溶液中和至 pH2~3,生成高碘酸钠溶液,再经提纯、分离杂质、蒸发浓缩、冷却结晶、离心 分离、干燥,制得高碘酸 钠成品,其反应方程式: HIO4+NaOH?NaIO4+H2O (3) 乙二醇。 (4) 0.01mol/L 氢氧化钠溶液。 【实验操作】 1. 制作标准曲线: 取 6 支干燥试管,按下表操作 管号 0 1 2 3 4 5 高碘酸钠， ml， 0 0.5 1.0 1.5 2.0 4.0 蒸馏水， ml， 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 0 各取 0.1 ml,定容至 25 ml,在 223nm 处测定光密度 A 223 横坐标为高碘酸钠毫摩尔数,纵坐标为光密度值,绘制标准曲线。 2. 样品测定 称取多糖样品 25mg,用少量水溶解,加入 30mmol/L 高碘酸钠溶液,定容至 25ml, 置于暗处,室温下进行反应,于 0,6,12,24,36,48…小时间隔取样 0.1 ml,蒸馏水稀 释 250 倍后,使用紫外分光光度计在 223nm 处测定光密度。至光密度值达一稳定值 时,加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。由此光密度值根据标准曲线计算出高 碘酸的消耗量。取 2ml 上述反应溶液,测定甲酸的生成量。剩余部分进行 Smith 降 解。 3. 甲酸测定: 取 2ml 上述反应溶液,加一滴溴甲酚蓝作指示剂,用 0.01mol/L 氢氧化钠溶液滴 定甲酸的释放量。 【注意事项】 为避免发生超氧化,反应溶液的 pH 值应控制在 3~5,而且一定要在低温、避光处 进行 实验 生化分子 糖链的序列测定—Smith 降解法 () Smith 降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成 稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解,用纸层析鉴定水解产物,由水解产物 可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例,其反应式如下图: 以 1?2 位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基仅消… Smith 降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成 稳定的多羟基化合物。