细胞培养基本技术.ppt

7、亚系（sub－line）：由原细胞系分离出的具有与原细胞系不同性状的细胞系。 8、有限细胞系（finite cell line）：细胞系形成后仅能维持有限传代次数，最后死亡。 9、连续或无限细胞系（continuous cell line or infinite cell line）：具有无限繁殖能力（获得不死性：immortality）和能反复进行传代细胞系。 第六十一页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 10、*细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物称细胞株。 11、亚株（sub－strain）：由原细胞株分离出的具有原株性状不同的细胞株。 第六十二页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 12、体外培养转化（in vitro transformation）：细胞在体外培养中发生与原细胞遗传性状不同的变化，但不一定具有致癌性。 13、汇合（confluent）：细胞相互连接成片占据所有底物面积。 14、超汇合（super confluent）：单层培养细胞附在底物上生长，汇合后发展成多层状态。 15、接触抑制（contact inhibition）：细胞汇合相互接触后失去运动的现象。 第六十三页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 16*克隆（clone）：由单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体。 17、克隆形成率（cloning effeciency）：向底物接种单细胞悬液能形成细胞小群的百分数。 第六十四页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 四、培养细胞一代生长过程： 体外培养细胞从细胞接种到分离再培养，每代贴附生长细胞的生长过程一般要经过以下五个阶段。游离期、贴壁期、潜伏期、指数增生期、停止期。 第六十五页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 细胞传代的三个阶段 1）游离期： 细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间。细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形. 10分钟一4小时。 第六十六页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 细胞附着于底物上，游离期 结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。 底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等 血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。 进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团） 2）贴壁期： 第六十七页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 第六十八页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 第六十九页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 3）潜伏期 此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期 一般为6～24小时。 第七十页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 4）对数生长期（指数增生期）： 细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 指数生长期是细胞活力最好的时期，在接种细胞数量适宜情况下，指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制（Contact inhibition）。而恶性细胞则无接触抑制现象，因此接触抑制可作为区分正常与癌细胞标志之一。 癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制（Density inhibition） 第七十一页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 5）停止期（平台期）： 细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性 第七十二页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 四、原代培养细胞的生命期 原代培养期 传代期 衰退期 第七十三页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 细胞培养的生长过程： a.原代培养或初代培养期 首次培养(1～4周) 细胞接种后一般几小时内就能贴壁，并开始生长 如接种的细胞密度适宜，5天到一周即可形成单层 第七十四页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 b.传代期 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种至两个或者更多的培养器皿中(数天到一周左右) 目的：传代以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续 培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3或l:5以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养 第七十五页，编辑于星期三：十四点 五十一分。 细胞传代方法：3种 1.悬浮生长细胞传代 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混