化学发光成像系统及其实用技术.pptVIP

感光胶片 冷CCD 感光胶片－－它已经被认为是对固定在膜上的蛋白或核酸进行化学发光检测的强有力的工具，如Southern、Northern和Western杂交的化学发光检测。 环境要求高 操作要求严 时间较长 弱光成像设备是基于超高灵敏度的CCD相机可以检测到由样品表面发生特定的反应后发射出来的光。 这些设备不但可以在单分子水平定量发光的强弱，还可以进行定位。 CCD成像技术：基于CCD的影像系统已成为化学发光印迹结果获得和记录的好工具。这些系统在信号测试的动态范围上表现出很好的效果。 环境要求低 操作要求简单 摄像时间短，并且可以获得多个影像和容易存储 灵敏度高，CCD的量度大小为3－4个级数，而X－光片仅为1个级数 Cool Image ChemiDoc XRS 全密封一体式暗箱 冷却CCD 操控面板 光源及激发光源（荧光） 多位滤镜轮 图像捕获系统 图像分析系统 1、密闭要好，不能有外界光线的干扰 2、内壁涂层均匀，尽量减少反光 制冷-20 ℃ ~-40℃，否则长时间曝光会出现噪点 光圈 焦距 缩放 光源 CCD 制冷 电源 读 卡 器 可选择不同波长的滤光片，以进行荧光成像 配备不同波长的光源以满足荧光发光的需要。 白光用于聚焦。 打开电源→打开显示器→打开仪器主机 打开图像捕获软件 选择适合的滤镜 将准备好的化学发光底物均匀覆盖已标记好二抗的膜上(注意要在膜的正面) 在软件工具栏中选择special菜单中的start capturing 将膜放入暗箱，打开白光光源（A），打开CCD（CAMERA），调节光圈大小（IRIS），调节图像大小（ZOOM），调节镜头聚焦（FOCUS）直至清晰 关闭光源，将光圈调至最大，打开COOL按键，在软件工具栏中选择special菜单中的Average Frames 输入累积帧数（最大9999，30帧/秒），选择 Integrate On-chip，点击OK 等待，直至鼠标双箭头消失 在File菜单中选择保存图像（格式最好选用TIF） 关闭CCD，关闭制冷 图象的处理和分析（quantity_one） 详见quantity_one使用指南 仪器使用方面的问题 实验过程中的问题(Western Blot) 分清膜的正反面 图像采集前必须聚焦 未关闭光源 未打开制冷开关 曝光时间过长 及时关闭CCD和制冷开关（延长仪器使用寿命） 分清膜的正反面 图像采集前必须聚焦 未关闭光源 未打开制冷开关 曝光时间过长 临床检验诊断学教育部重点实验室 xxx 教授 复习化学发光的基本知识 化学发光成像系统的应用 化学发光成像系统的发展 化学发光成像系统的结构 化学发光成像系统的操作 化学发光成像系统的注意事项 Western Blot常见问题分析 化学发光（CL）是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。 一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件： 第一：反应必须提供足够的能量 （170～300 KJ/mol） 第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。 依据供能反应的特点，可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 (供能反应为一般化学反应 )； 2 ）生物化学发光分析法 (供能反应为生物化学反应；简称 BCL)； 3 ）电致化学发光分析法 (供能反应为电化学反应，简称 ECL)等。 1 ．鲁米诺及其衍生物 2 ．光泽精 3 ．洛粉碱 4 ．过氧化草酸酯类 5 ．吖啶酯类 灵敏：化学发光免疫分析方法的检测灵敏度要远远高于ELISA、荧光免疫等，而优于或与同位素检测相当； 方便：在使用方便性上，化学发光与传统ELISA方法一样简单易用； 安全：在对人体和环境的危害上，化学发光对此没有任何担忧。 无机化合物化学发光分析 有机化合物的化学发光分析 化学化光在生物领域的应用 金属离子分析 其它无机化合物的分析 有机酸 有机碱 氨基酸 糖类 类固醇与类酯 药物 高灵敏度使得它非常适合于微小化的生物分析装置，以用于小量样品体积的基因和蛋白的高通量筛选。 体外和体内连续检测生物过程，可应用于临床、诊断、和药物开发等。 结合发光酶或某些在基因水平有生物特异结合位点的发光蛋白发展了超敏感和选择性的生物分析工具。 液相样品的检测-------化学发光分析仪 固相样品的检测-------化学发光成像仪 采用电化学发光免疫技术，被特殊标记物标记的抗体（抗原）与待检测抗原（抗体）结合后，与参与反应物在电极上发生一系列的反应并释放出光子后，通过光电倍增管检测光信号，并通过计算机的计算分析，得出结果 新的BL/CL生物技术工具 向微型化、自动化的方向发展 1、免疫检测 化学发光已经广泛的