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— PAGE \* Arabic 1 — 食品中肉毒杆菌检测 食品中肉毒杆菌检测  中国科学院广州化学研究所分析测试中心  卿工--189--3394--6343  肉毒梭菌是一种生长在缺氧环境下的致病菌，全称肉毒梭状杆菌，在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力，它在繁殖过程中所分泌的肉毒毒素具有极强的毒性，是KCN毒性的一万倍。纯化结晶的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠，对人的致死剂量约0.1μg。它通过阻断人体神经接头，导致全身麻痹、瘫痪，严重时能引起人呼吸肌麻痹，导致无法呼吸，最终死亡。目前报道新西兰恒天然浓缩乳清蛋白粉大批量被肉毒梭菌污染，多家产品被卷入其中。  食品中肉毒梭菌检测(PCR检测方法)  一、实验原理  本中心结合国标GB/T4789.12-2003食品中卫生微生物学检验肉毒梭菌及内毒素检验和SN/T2525-2010食品中肉毒梭菌的PCR检测方法对食品中肉毒杆菌进行检验。  将样品经增菌后划平板分离单菌落，挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤(TPGY)培养基培养，对培养物用DNA提取试剂盒抽提DNA，进行PCR扩增，用琼脂糖凝胶电泳检验PCR产物中是否含有肉毒梭菌的的特征条带，从而对食品中是否污染肉毒梭菌进行快速检测。  二、仪器和试剂  Heraeus Multifuge X1R高速台式冷冻离心机，Bio-RAD ALS1296PCR仪器，Tanon-3500凝胶成像分析系统，YQX-Ⅱ厌氧培养箱，恒温水浴锅。  三、试验方法  1、样品的增菌培养  取庖肉培养基2管和TPGY培养基2管，煮沸10min~15min（为了排除溶解于培养基中的氧，切勿摇动），迅速冷却。每15ml培养基中接种1g~2g固体食品或1ml~2ml液体食品（缓慢地将接种物接入肉汤液面下）。将样品接种2管庖肉培养基（35±1℃下培养）和2管TPGY培养基（28±1℃下培养），均厌氧培养5天。观察培养物的浊度、产气、肉粒的消化和产生的气味。若有生长继续以下操作，若无生长，则继续培养10天。  2、培养物分离  取2ml培养液置于无菌试管中，加入等量无菌无水乙醇，混匀，放置1h。用接种环取2环经处理过的培养物接种到厌氧卵黄琼脂上，35±1℃下厌氧培养48h。挑取可疑菌落接种到TPGY培养基，35±1℃下厌氧培养24h。  3、DNA提取、扩增  取1.4mlTPGY培养物转移到离心管中，13000r/min离心2min，弃去上清液。沉淀加入500μl 生理盐水，震荡重悬30s，13000r/min离心2min，弃去上清液。沉淀中直接加入50μlDNA提取液充分混匀，沸水浴10min，13000r/min离心3min，取上清液4μl进行PCR扩增。扩增的DNA跑琼脂糖凝胶电泳，电泳结果用凝胶成像系统记录。  涉及地区：广东省食品中肉毒杆菌检测、浙江省食品中肉毒杆菌检测、福建省食品中肉毒杆菌检测、海南省食品中肉毒杆菌检测、云南省食品中肉毒杆菌检测、广西省食品中肉毒杆菌检测、贵  州省食品中肉毒杆菌检测、新疆省食品中肉毒杆菌检测、四川省食品中肉毒杆菌检测、重庆市食品中肉毒杆菌检测、西藏省食品中肉毒杆菌检测、湖南省食品中肉毒杆菌检测、江西省食品中肉毒杆菌检测、湖北省食品中肉毒杆菌检测、上海市食品中肉毒杆菌检测、北京市食品中肉毒杆菌检测、天津市食品中肉毒杆菌检测、安徽省食品中肉毒杆菌检测、江苏省食品中肉毒杆菌检测、甘肃省食品中肉毒杆菌检测、宁夏省食品中肉毒杆菌检测、内蒙古省食品中肉毒杆菌检测、黑龙江省食品中肉毒杆菌检测、吉林省食品中肉毒杆菌检测、辽宁省食品中肉毒杆菌检测、山东省食品中肉毒杆菌检测、陕西省食品中肉毒杆菌检测、山西省食品中肉毒杆菌检测、河南省食品中肉毒杆菌检测、河北省食品中肉毒杆菌检测