3～5细胞融合技术·干细胞工程·克隆技术.pptxVIP

第三～五节 细胞融合技术?干细胞工程?克隆技术; 动物细胞融合与单克隆抗体 1.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较;;;2.单克隆抗体的制备 (1)制备过程：;专一抗体 检验阳性;(2)关键环节： ①取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原，否则不能获得单克隆抗体。 ②细胞融合后需经二次筛选： 第一次：在特定的选择性培养基上，未融合的亲本细胞(B淋巴细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。其特点是既能迅速大量繁殖，又能产生单一的特异性抗体。 第二次：经选择培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞)，需经克隆化培养和抗体检测，经筛选后才可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。;【高考警示钟】 1.植物体细胞杂交与动物细胞融合中酶的作用对象不同，纤维素酶和果胶酶作用于细胞壁，而胰蛋白酶等作用于细胞间质。 2.灭活的病毒保持了其抗原性，但毒性消失。 3.植物杂交细胞在激素诱导下能表达出全能性，但动物杂交细胞的全能性不能表达。; 比较三种造血干细胞移植的优点和缺点;; 动物体细胞核移植与克隆动物 1.原理：动物体细胞核具有全能性 2.过程;【高考警示钟】 1.供体细胞：取优良动物的体细胞培养，一般选用传代10代以内的细胞，这样可以保证正常的二倍体核型。 2.动物体细胞核移植是一种无性繁殖技术，用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。; 动物细胞融合和单克隆抗体制备 【典例训练1】有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：;(1)若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于受一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800lx时都不能生长。要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞，较为简便的筛选方法是_____。 (2)若a、b表示两种植物体细胞，则??d细胞形成杂种植株的原理是_____，这种育种方法的优点是_____。;(3)若a、b分别为骨髓瘤细胞和B淋巴细胞，则d细胞特点是_____。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有_____的特点。生产上一般不能通过直接培养B淋巴细胞的方法生产单克隆抗体的主要原因是_____。 (4)下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来：_____。;【解题指南】 1.考查实质：植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备。 2.解题关键： (1)hr是a、b产生配子中相同的配子，另外两种配子分别是Hr、hR。 (2)两个不同的细胞形成的杂种细胞发育成植株。 (3)骨髓瘤细胞特点、B淋巴细胞特点与融合后的细胞具备的特点之间的关系。 (4)单克隆抗体产生的过程由细胞融合和杂交细胞的培养两部分组成。;【解析】(1)a的花粉基因型为Hr和hr，b的花粉基因型为hR和hr，只有HhRr的基因组合方式没有隐性纯合基因，所以杂种细胞HhRr能在光照强度大于800lx时生长。 (2)植物体细胞杂交形成植株，是植物细胞全能性的表现，克服了自然条件下物种之间的生殖隔离。;(3)在单克隆抗体产生过程中细胞d是杂交瘤细胞，具备了融合前两种细胞的优点，能无限增殖且产生特定抗体。而且反复筛选的细胞d产生的抗体品质优良。B淋巴细胞能产生特定抗体，但不能无限增殖，无法得到大量的抗体。 (4)只能注射特定抗原后才能得到特定的B淋巴细胞，再与骨髓瘤细胞融合，经筛选后可体内培养也可体外培养以得到大量单克隆抗体。;答案:(1)给予大于800lx的光照 (2)植物细胞的全能性 克服了远缘杂交不亲和的障碍 (3)既能无限增殖，又能产生特定抗体 特异性强、灵敏度高、化学性质单一 B淋巴细胞不能无限增殖 (4) ;【互动探究】(1)若a、b表示两种植物体细胞，则融合前需进行什么操作？ 提示：利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。 分析：细胞融合是利用细胞膜的流动性，细胞壁如果存在无法进行融合。 (2)植物体细胞杂交与单克隆抗体产生过程中，a、b融合的方法相同吗？ 提示：植物细胞可用物理法如电激等，化学法如用PEG诱导；动物细胞除物理法和化学法外还可以用灭活的病毒诱导。; 植物体细胞融合 【典例训练2】通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优势(甲耐盐、乙高产)，培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实验流程并回答问题：;(1)A是_____酶，B是__