第八章动物早期胚胎操作.docx

第八章动物早期胚胎操作 ?一、胚胎移植技术 ?二、胚胎分割技术 ?三、嵌合体技术 ?四、细胞核移植技术 第一节、胚胎移植技术 ? 一、胚胎移植的概念及生理基础和原则： rA?概念：借助一定的器械，从一头优良雌性 动物的输卵管或子宫内取出早期胚胎，移 植到另一头处于相同生理阶段的雌性动物 的相应部位，使之继续发育成为新个体。 即借腹怀胎。 rA ?供体：提供胚胎的个体，一般为良种。 ,受体：接受胚胎的个体，提供胚胎孕育时 间和空间。 胚胎移植的意义 ?1 .充分发挥优良母畜的繁殖潜力，加快优 良品种的改良。对牛羊等繁殖力较低的优 良品种来说，结合人工受精技术可克服其 产仔数和世代间隔的限制。 ?2.体外受精、胚胎嵌合和核移植等技术都 必须通过胚胎移植获得活体。 -3.结合胚胎冷冻可长期保存珍贵遗传资源, 并且方便它们的运输。 ?）胚胎移植的生理学基础 ?成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在 外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和 排卵数可达十数个 ?每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 ,早期胚胎处于游离状态 ?胚胎发育不存在免疫问题 ?胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组 联系 ?胚胎的遗传性不受受体的影响 1）胚胎移植的基本原则 ?胚胎移植前后所处的环境的同一性 -供体和受体在分类学上的相同属性。 -动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的 同期性。 -动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性 ?胚胎发育的期限：胚胎日龄不能超过周期黄体的寿命。 ?胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不 受不良因素的影响。 二、胚胎移植的技术程序 1 .供体和受体的选择 2供体的超数排卵处理 同期发情处理 供体早期胚胎的收集 5 .胚胎的检查 6.胚胎的保存与培养 .胚胎的移植 .供体和受体的术后观察 一）供体和受体的选择 ?供体应具有相当高的育种价值 ?供体生殖机能应处于较高的状态: ?供体生殖机能应处于较高的状态: 无生殖 系统疾病,体质强健 系统疾病, 体质强健 ?受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适 应性强，体型中上等，非优良品种 ?受体健康状况良好，已进入发情季节 ?供受体发情时间应接近或一致 二）供体的超数排卵处理 ?超数排卵： 雌性动物间情期内，注射外源促性腺激素，诱 发其卵巢上大量卵泡发育并排卵的方法称为超数排 卵 ?超排原理： 外源激素W以改变卵巢上只有一个或少数卵泡 成熟排卵的定势，解除单胎动物优势卵泡发育对同 一暖其彳也如泡疫育曲抑制作用，，足祐向一拨如施群 中大部分卵泡能够发育成熟并排卵。 ?动物常用超排激素： PMSG、FSH、LH、PGF2a. GnRH、hCG等 ?超数排卵的意义 采用超数排卵可大大增加每次的排卵数量 ?在科研上可以在短时间内取得大量的卵和 胚胎，可以满足胚胎工程研究、遗传工程 研究和建立胚胎库的需要。大大缩短了研 究周期 ? 113:闢器聽动物的繁殖数量 超数排卵方法 1 .小鼠的超数排卵 腹腔注射PMSG10U,一 般选择在中午注射，间隔 48小时后注射HCG,光照 周期保持12?14h, 2.牛的超数排卵 1)促卵泡素(FSH)减量注射法：供体牛在发情 后的9?13d肌注FSH,早晚各一次，间隔12h,分 4d减量注射。在第3d时同时宫注PGF2a 2. 0~2. 4mg 或氯前列烯醇0. 6mgo如使用国产FSH总剂量为325 单位时，处理方法如附图所示。超排剂量根据不 同厂家激素确定适宜剂量，国产激素320?360单 位，进口激素28?36mg。 牛超数排卵示意图 14fc 2M FSH FSH FSH F91 PGF2 a 75x2 50x2 25x2 12.5x2 人工授精 2) .PMSG法 孕马血清促性腺激素(PMSG) 孕马血清促性腺激素(PMSG)处理法 III 在情期的11?12d, 一次肌注PMSG2500—30001U, 48h后宫注PGF2a 2, 4mgo发情后约18h肌注等量的 抗PMSG。 发情观察和配种 PGF2g处理后40?48h,大部分处理牛发情。 通常要求从注PGF第2d傍晚开始观察发情，至少 早晚各观察一次。在观察到接受爬跨后4?6h进 行第一次输精，间隔12h后第二次输精。每次有 效精子数不得少于50X 106,输入两侧子宫角或 子宫体。注意输精时不得触摸卵巢。 ? 3 .羊的超数排卵 ?可采用牛的超排处理方法，FSH减量注射 或 PMSG + PGF2a 法。 ?也可釆用如下方法： ?每日肌注孕酮10-12mg,连续处理约14d后, 一次性肌注 PMSG1000—2000IU, 1—2 天 配种。 影响超数排卵的因素： 1 .动物个体状况： 不同个体对激素的敏感性不同