基因文库技术.pptxVIP

Leptin基因;Effects of recombinant human leptin treatment in a child with leptin deficiency. ;第四章 目的基因的分离克隆 ;某生物基因组DNA片段(例如10n个)与载体分子重组，重组DNA转化宿主细胞，转化细胞在选择培养基上长出的单个菌落（或噬菌斑）即为一个DNA片段的克隆。全部片段克隆的集合即为该生物的基因文库。;2 基因文库的分类 ;2）克隆文库和表达文库 ;3）不同载体的文库 ;4）减法文库 减法文库又称扣除文库及精简文库。它是通过野生型DNA与缺失型DNA，或不同时空、不同环境条件的两种cDNA样品反复杂交，去除杂交体后,将剩余的DNA或cDNA片段进行克隆而构建的文库。 5）亚克隆文库 亚克隆文库是将人工染色体文库或粘粒文库中克隆的大片段DNA用鸟枪法(shotgun)随机小片段化，然后用这些随机小片段建立的DNA文库。 ;3 基因文库的构建 ;基因组文库（genomic DNA library）：是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的片段，然后连接到某种载体上转化受体细胞而形成的克隆的集合。 cDNA文库（cDNA library）：是指某生物某一发育时期、某一组织或某种环境条件下所转录的mRNA经逆转录形成的cDNA片段与载体连接转化受体细胞而形成的克隆的集合。 ;噬菌斑;cDNA（complementary DNA，互补DNA）： 以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下形成的DNA。;2）cDNA文库构建的基本步骤 （1）细胞总RNA的提取并分离纯化出mRNA （2）合成cDNA的第一条链 （3）将mRNA-DNA杂交分子转变成双链cDNA （4）双链cDNA与载体连接形成重组DNA （5）重组DNA转化宿主细胞 ;5 基因文库的筛选 ;1）核酸杂交法;探针 (probe) ：一小段用同位素、生物素或荧光染料标标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在硝酸纤维素膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 ;探针的设计;2）免疫学检测法;3）PCR筛选法;1 基因文库的含义是什么？ 2 什么是基因组文库和cDNA文库？二者有哪两点主要区别？ 3 根据所使用的载体的不同类型，基因文库分为哪四种？ 4 举例说明基因组文库构建的基本步骤。 5 核酸杂交的基本原理是什么？什么是探针？用核酸杂交法筛选基因文库时，探针的序列是根据什么设计的？ ; 多克隆位点（MCS，multiple cloning sites）： 是一段经过特殊设计的、具有许多种不同的限制性内切酶单一识别 位点的DNA短序列。 ;;;早衰的病因？;第四章 目的基因的分离克隆 ;2 基因文库的分类 ;2 基因文库的分类 ;探针 (probe) ：一小段用同位素、生物素或荧光染料标标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在硝酸纤维素膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 ;探针的设计;2）免疫学检测法