肿瘤转移（尾静脉注射模型）.pdfVIP

解螺旋 陪伴医生科研成长 肿瘤转移模型 （尾静脉注射法） 1. 实验原理 肿瘤细胞具备一定的侵袭转移的能力，把肿瘤细胞注射入裸鼠的血液系统内，能够较好 地模拟肿瘤细胞脱离原发灶进入到血液循环中的情况，通过观察远处器官（肺、肝等）内转 移灶的形成情况，能够判断肿瘤细胞的转移能力。 2. 实验目的 通过构建尾静脉注射肺转移模型，验证肿瘤细胞在体内的转移能力。 3. 实验材料 3.1. 主要试剂 4-6 周龄的SPF 级BALB/c 裸鼠若干（一般可以雌雄对半，特殊的需要偏向选择， 比如 研究宫颈癌要选取全雌性，研究前列腺癌要选取全雄性。通常为了避免裸鼠饲养过程中死亡 而损失数据，在实验阶段，每组的只数会设置在8-10 只；建立模型的预实验可适当减少数 量），待接种的细胞株，细胞培养基，0.25%胰蛋白酶-EDTA，胎牛血清，无菌预冷PBS，75% 酒精。解螺旋/ 3.2. 主要仪器 培养皿，生物安全柜，二氧化碳培养箱，倒置相差显微镜，离心机，离心管，移液枪， 超净台，注射器 4. 实验步骤 4.1 制备细胞悬液 预先将细胞接种到培养皿并于 37℃、5%CO 的培养箱中培养，待对数生长期的细胞生长 2 达到80-90%，弃去培养皿中旧培养基，用无菌预冷PBS 冲洗两遍，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA 1ml 到培养皿中消化细胞，静置约2-5min，用倒置相差显微镜观察细胞消化状态，待镜下细 胞出现晒网状空隙时加入2-3ml 完全培养基后，用移液枪轻轻吹打，使细胞悬浮，收集细胞 悬液至离心管，并使用离心机1000r/min 离心5min，弃去上清，用预冷无菌PBS 洗两遍， 再加入预冷无菌PBS，轻轻吹打细胞沉淀，混匀成细胞悬液，用细胞计数板计数细胞，重悬 7 细胞至密度为1×10 个/ml （可根据接种细胞量调整），最终将细胞悬液至于冰上暂存。 4.2 细胞接种 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 在超净台上，将裸鼠固定在固鼠器内，压住裸鼠尾巴根部，用酒精棉球擦拭尾巴消毒并 扩张血管，用1ml 注射器吸取单细胞悬液，于尾部中外三分之一处进针，控制注射速度。每 6 只0.1ml，即1×10 个 （不同的细胞接种量可能不同，需要预实验进行摸索）。 4.3 结果观察 接种后，有条件的可通过活体成像系统定期观察细胞的转移情况。于肿瘤细胞接种4-8 周后处死并解剖小鼠，观察肺、肝、淋巴结等脏器有无转移灶，统计各部位的转移灶数目以 及大小。对转移灶进行病理取材，置于福尔马林固定后，制成石蜡切片，HE 染色后镜下观 察。组织也可根据实验需求进行冻存 （液氮）。解螺旋/ 5. 典型文献1 1. Yang L, Qiu J, Xiao Y, et al. AP-2beta inhibits hepatocellular carcinoma invasion and metastasis through Slug and Snail to suppress epithelial-mesenchymal transition. Theranostics 2018; 8 (13): 3707-21. 2