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解螺旋 陪伴医生科研成长 肿瘤细胞耐药性检测 1. 实验原理 肿瘤耐药是临床肿瘤化疗中的常见现象，是困扰临床的重要难题和亟待解决的困境。耐 药细胞株是研究肿瘤耐药的常用体外模型。目前对细胞耐药能力检测的最常用方法是检测细 胞的IC50 (half maximal inhibitory concentration)。 IC50，是指某一药物或者物质(抑制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的 某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物)的 50%量时的浓度。在凋亡方面，可以理解为一 定浓度的某种药物诱导肿瘤细胞凋亡50%，该浓度称为50%抑制浓度，即凋亡细胞与全部细 胞数之比等于50%时所对应的浓度，IC50 值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力，即诱导能力 越强，该数值越低，即细胞对药物的耐受程度越低。通过比较细胞样本的 IC50 （可与敏感 细胞或者亲本细胞比，也可与设计好的对照组比），即可评价该样本对药物的耐受能力。 解螺旋/ 2. 实验目的 检测细胞样本的IC50 3. 实验材料 3.1. 主要试剂 化疗药、目标细胞（可设置不同的分组）、培养基、胰酶等 3.2. 主要仪器 超净台、二氧化碳培养箱、离心机、显微镜、酶标仪 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 4. 实验步骤 1. 取对数生长期的细胞，接种于 96 孔板内，待细胞贴壁后，换上带有不同梯度浓度药物 的培养基（如0.1，0.25，0.5，1，2，5，10 μM。若是浓度不确定，可先查阅文献， 获得一个大致的范围，在这个范围里设置梯度，第一轮，可以采取大倍数梯度稀释，如 10 倍，第二轮，小幅度梯度，如2 倍倍比稀释或等差比例稀释。 2. 于不同的时间点检测细胞增殖情况。解螺旋/ 3. 计算细胞的IC50。 5. 应用实例文献1,2 1. Pu Y, Zhao F, Wang H, et al. MiR-34a-5p promotes the multi-drug resistance of osteosarcoma by targeting the CD117 gene. Oncotarget 2016; 7 (19): 28420-34. 2. Zhao Z, Li J, Jiang Y, Xu W, Li X, Jing W. CLDN1 Increases Drug Resistance of Non-Small Cell Lung Cancer by Activating Autophagy via Up-Regulation of ULK1 Phosphorylation. Med Sci Monit 2017; 23: 2906-16. 2