药品生产过程验证 过滤除菌工艺验证 除菌过滤器截留微生物能力的验证.doc

知识点4、除菌过滤器截留微生物能力的验证 一、定义 用来检测除菌过滤器去除溶液中微生物能力的方法是进行生物指示剂的挑战性验证试验。某种微孔滤膜过滤器在给定的药液及其他工艺条件下确定了起泡点的临界压力后，还必须应用生物指示剂进行挑战性试验，只有在通过挑战试验的条件下，临界压力才能成为该条件下起泡点试验的判断标准。 所谓生物指示剂的挑战性验证试验，是模拟药品实际生产条件下，用过滤器对缺陷假单胞菌ATCC19146的截留性能来判断除菌过滤器的截留能力。 二、试验条件 1、生物指示剂 采用缺陷假单胞菌ATCC19146作为生物指示剂，它是一种革兰氏阴性杆菌，平均直径为0.3μm。这种菌因其细胞小，总能透过0.45μm的膜并污染已经过滤的蛋白质。在适当的培养条件下，它能在短时间内大量繁殖成单细胞形态。由于它的生化活性很小，因而用作验证试验的安全性好； 2、菌液的浓度 应能保证每平方厘米有效过滤面积达到107个菌的挑战水平。之所以选择这个浓度进行挑战试验，一则是因为滤膜单位面积的微孔数目也处在这一数量级；二则因为这一浓度有相当的安全性。因为在过滤过程中，大一些的孔承担了过滤量的主体，即短小芽孢杆菌通过滤膜大一些孔的概率要高，能经受这一挑战水平的过滤器，其孔径必然小于0.3μm。 对筒式过滤器而言，试验流量可达到2～3．86L/(0.1m2·min)。 3、试验的压力 约为0.20MPa； 三、验证操作过程 验证试验装置的示意图见图。此试验中，可以使用生理盐水或蛋白胨作阳性对照。 图 除菌过滤器微生物挑战试验装置 1、操作步骤 （1）将过滤系统灭菌； （2）用无菌生理盐水或0.1％蛋白胨水湿润过滤器后，进行过滤器的完整性试验； （3）将此溶液用一阴性对照用无菌过滤器压滤，培养并检查无菌； （4）将事先标定浓度的微生物悬浮液装入适当容器，并对待试验的过滤器进行挑战性试验，操作同上； （5）进行过滤器的完整性检查，确认试验过程中滤膜没有损坏； （6）培养并观察结果； 2、结果评价 该试验要求按照滤膜上应加载的试验指示菌的数量为107个／cm2。判断的标准是：除菌过滤器滤膜截获微生物要求对其直径在0.3μm附近呈正态分布的缺陷假单胞菌的截留能力应达到107个/cm2。 如阴性对照过滤器获得阳性结果，则试验无效； 如挑战性试验的滤液中无菌落出现，则此过滤器合格，若长菌，则过滤系统不合格。