【培训课件-临床色谱质谱检验技术】_液相色谱质谱技术（四）.pptVIP

一、复习 三、液相色谱质谱联用技术临床应用的要求 《临床色谱质谱检验技术》 主要内容 二、液相色谱质谱联用方法建立（四） 四、液相色谱质谱联用技术的临床应用 一、复习 《临床色谱质谱检验技术》 复习 液相色谱-质谱联用技术 将液相色谱的分离能力与质谱的鉴定能力结合起来进行定性定量分析的基本分析技术 液相色谱质谱联用仪的组成部分 液相色谱部分（高压输液系统、进样系统、色谱柱、柱温箱） 质谱部分（离子源、质量分析器、检测器、真空系统） 数据处理系统 液相色谱质谱联用方法建立的流程及主要考察因素？ 信息及文献检索（项目背景、意义，目标化合物分析，检测方法研究现状……） 质谱方法建立（离子源选择、质量分析器选择、扫描方式选择、参数优化） 色谱方法建立（流动相选择、洗脱方式、色谱柱选择、内标选择、基质效应考察） 样品处理方法建立 二、液相色谱质谱联用方法建立（四） 《临床色谱质谱检验技术》 使检测风险最小化 最小化基质效应（最有效的方式） 减少离子抑制/增强效应，减少背景干扰 减少方法可变性 不同的病人基质均可使用 不同的检测系统间可进行方法转移、有可比性 提高灵敏度 样品浓度合适（浓缩或稀释） 去除干扰物 纯化/净化样品 提高方法耐受性 提高仪器、色谱柱的使用寿命 样品处理方法建立—目标 样品处理方法建立—考虑因素 样品处理方法建立—样品制备技术 液液萃取 稀释 固相萃取 离心 过滤 样品制备 蛋白沉淀 衍生化 免疫抑制剂（CsA） 样本类型：EDTA抗凝全血，药物在红细胞和血浆之间的分配比例超过30:1 沉淀剂的选择：乙腈、甲醇、ZnSO4/乙腈、ZnSO4/甲醇 沉淀剂的量：3-8倍样本体积 混匀时间 离心时间和转速 离心时间 样品制备技术——蛋白沉淀 尿液有机酸 萃取溶剂的选择：乙酸乙酯 萃取溶剂的量 混匀时间 离心时间转速 萃取次数 浓缩、复溶 样品制备技术——液液萃取 甲氧基肾上腺素类物质（甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素） EDTA抗凝血浆 SPE柱类型（填料）：弱阳离子交换SPE柱，在PH5时，保留碱性化合物（高选择性） 活化、上样淋洗、洗脱条件 浓缩复溶 样品制备技术——固相萃取 样品制备技术比较 三、液相色谱质谱联用技术临床应用的要求 《临床色谱质谱检验技术》 与法规部门批准的临床检验项目不同，大部分LC-MS/MS方法是由个别实验室自行建立的，属于LDTs项目； 按照国际标准化组织（ISO）、国际理论和应用化学联合会（IUPAC）以及美国国际分析化学家协会（A0AC INTERNATIONAL）对于内部开发的测试项目的要求为：“国际普遍公认，实验室必须采取适当的质量保证措施以确保有能力并且确实提供质量合格的数据”； 所有新建的方法需进行验证，以确保方法能满足性能要求，并且应有把握得到准确、可靠、可重复的结果。 方法学验证 方法学验证的内容 四、液相色谱质谱联用技术的临床应用 《临床色谱质谱检验技术》 特异性强：LC-MS监测待测物原型及其特征性碎片，特异性更好，克服了免疫学方法交叉免疫反应的问题。潜在干扰少，适合复杂生物基质（如血浆、血清样本等）的定量检测。 灵敏度高：质谱仪灵敏度可达到ng/mL（10-9）~pg/mL（10-12），需要的样本量少，结果准确度高 适用范围广：几乎可以检测所有的化合物，解决了分析热不稳定化合物的难题 速度更快：LC-MS可同时检测上千种待测物，通量高，各检测通道之间不存在干扰，同一个方法可适用于一类待测物 液相色谱质谱联用技术的临床应用优势 液相色谱质谱联用技术的临床应用优势 分离能力强：即使被分析混合物在色谱上没有完全分离开，但通过MS的特征离子质量色谱图也能分别给出它们各自的色谱图来进行定性定量 成本更低：长期运行（大批量测定），LC-MS前处理耗材，检测试剂成本较免疫学方法更低 灵活性高：可根据临床需要自建方法，组合项目 新生儿遗传代谢病筛查 液相色谱质谱联用技术的临床应用优势 苯丙酮尿症（PKU) 甲状腺功能减低症(CH) G6PD缺乏症(G6PD) 先天性肾上腺皮质增生症(ACTH) 一滴血片，一种试剂，一次试验，一项参数，一种疾病 串联质谱遗传代谢病检测 成本高 低效 假阳性率高 省钱 高效 假阳性率低 新生儿筛查金标准 一滴血片，一种试剂，一次试验，106项参数，46种疾病 技术 样本处理复杂，人工操作 技术人才缺乏（临床背景、液相色谱质谱技术、仪器使用维护能力） 数据处理系统与实验室信息系统兼容性不够好，还难以实现检测数据的即时分析、传输和报告（如自动生化仪、化学发光仪等） 液相色谱质谱联用技术的临床应用局限 操作 仪器昂贵，初始投资大 实验室环境要求高（UPS电源、氮气供气等配套设施、隔离噪音等） 仪器操作复杂，定期维护，技术门槛高，需专业技术人员，要求高