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检验平台对科研的支撑作用
科研模式
人体
器官
组织
细胞
反转录
要
合成
转录
蛋白
RNA
DNA
信号通路會
转录因子
调控
检验支撑平台
动物
动物器官
组织
细胞
蛋白
RNA
DNA
信号通路會
转录因子
调控
、核酸提取平台
二、核酸检测平台
(一)微量核酸、蛋白定量仪
(二)PcR(聚合酶链式反应)扩增
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高温变性、低温退火和
适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA
双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条
人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq
酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点以单核苷酸为原料,沿
模板以5’→3方向延伸,合成DN新链这样,每一双链的DNA模板,经过一次
解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子.如此反复进
行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两
条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍。
(三)DNA重组与分子克隆
1、目的基因的获取
2、克隆载体的选择与改建
3、外源基因与载体的连接
4、重组DNA导入受体细胞
大肠杆菌
5、重组体的筛选
[8
6、重组体的复制
细菌培养
7、目的基因提取、纯化
破坏细菌,提取DNA,电泳
Chromosome dna
Targe
酶切
酶切
已
连援
转化
筛选
Recombinant plasmids
DNA分子克隆过程
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