总结凯氏定氮法.pdfVIP

凯氏定氮法 Johan Kjeldahl (1849-1900),在嘉士伯实验室发明了测定凯氏定氮法, 这种方法到目前仍然是我们测定谷物类物质蛋白质含量的主要方法 的主要方法。 凯氏定氮法原理::样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分:: 解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化 为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后 再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的 含量。 目前常用的有常量凯氏定氮法和微量凯氏定氮法，两者消化原理 和步骤基本相同，不同的是微量凯氏定氮法的样品量和试剂用量都很 少，另外有一套专门适合微量测定的仪器装置。 1 2 1 2 常量凯氏定氮法仪器组装图（11） 微量凯氏定氮法仪器组装图（22） 一、实验试剂 a·40%的氢氧化钠溶液：40g氢氧化钠加蒸馏水定容至100mL； b·0.01mol/L盐酸或硫酸标准溶液：按GB601配制与标定。可 先配制成0.1mol/L的母液，用时吸取10mL再定容至100mL； c·2%的硼酸溶液：2g硼酸加蒸馏水定容至100mL； d·浓硫酸： e·复合催化剂：硫酸钾或硫酸钠97g和无水硫酸铜3g的混合物； f·混合指示液：0.1%的甲基红乙醇溶液20mL与0.2%溴甲酚绿 乙醇溶液30mL混合摇匀。 二、 分析步骤 二、 分析步骤 二二、、 分分析析步步骤骤 a·消化：称取混匀的样品3g（精确至0.001g），放入干燥的凯 氏烧瓶中（避免样品粘在瓶颈内壁上），加入混合催化剂10g，硫酸 O 25mL，轻轻摇动烧瓶，使样品完全湿润。然后将烧瓶以45 角斜放在 支架上，用电炉缓慢加热，当瓶内泡沫消失后强热至沸。待瓶壁不附 有炭化物时，且瓶内液体为澄清浅绿色后，继续加热30min使其完全 分解（以上操作应在通风橱内进行）。 b·蒸馏：将消化好并冷却至室温的样品溶液全部转移到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度摇匀。向100mL接受瓶中加入20mL2% 硼酸溶液和2～3滴混合指示液，将接收瓶置于冷凝管下口，使下口 浸入到硼酸接收液中。再吸取10mL定容后的样品液，沿小玻璃杯移 入反应室，并用少量的蒸馏水冲洗小玻璃杯，塞紧棒状杯塞。向小玻 璃杯中加入20～30mL40%的氢氧化钠溶液（过量），慢慢提起棒状杯 塞，使氢氧化钠缓慢流入反应室（防止反应室气体从杯塞处外泄）， 立即塞紧棒状杯塞，并在小玻璃杯中加入蒸馏水使之密封。通入蒸汽 5min，降低接收瓶位置使冷凝管末端离开液面后再继续蒸馏 1min， 用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液并入接收瓶，取下接收瓶。 c·滴定：用0.01mol/L的盐酸或硫酸标准溶液滴定接收瓶瓶中 的液体，使之刚刚出现灰紫色即为终点，记录所消耗0.01mol/L的盐 酸或硫酸标准溶液的体积（mL）。 注意事项：在蛋白质测定过程中应注意与采用氨试剂的检测项目 时间错开，确保环境空气中无氨气的存在，否则将影响蛋白质的测定 结果，使最终结果偏高。 三、结果计算： 三、结果计算： 三三、、结结果果计计算算：： (V - V)×0.014×C×6.25 X（干基）=4 1 0 ×100……… (4) W（1-水分%）×0.1 式中： X4 试样的干基蛋白质含量，（%）； W 试样质量，（g）； V1 滴定样品所消耗盐标准溶液体积，（mL）； V0 滴定空白所消耗盐酸标准溶液体积，（mL）； C