生姜脱毒和组培快繁及栽培技术的研究.docVIP

生姜脱毒和组培快繁及栽培技术的研究 生姜属姜科姜属多年生宿根植物，营养丰富是药、食、加工等多用途经济作物，是我国重要的外贸产品。生产上生姜只能靠少数品种长期无性繁殖，易感染多种病毒，使姜体内积累多种病毒，从而导致生姜产量下降、品质降低，种性退化，—般减30% ~ 50%，严重制约了生姜的生产发展。国内外目前尚无高抗病毒的生姜品种和高效杀病毒药剂，因此采用茎尖组织培养脱毒生姜苗，成为防治病毒，高生姜产量和品质的首选方法。 本研究旨在通过热处理和茎尖培养相结合的方法，以优质姜种为材料，通过热处理法催芽、表面消毒、茎尖分生组织剥取、无菌苗诱导培养、增殖诱导培养、生根诱导等一系列实验操作及培养基配方优化，并在每个不同的培养阶段进行检测，建立脱毒良种繁育体系的工艺流程，有效去除引起生姜种性退化的烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)两种主要病毒。该项研究为脱毒姜种的快速繁殖提供了技术保障，为生产应用提供了技术支撑。 1 生姜的脱毒处理 精选块大、肉厚、皮色黄亮和无病虫害的健壮姜块，在自来水下洗掉泥巴，再用少量洗衣粉浸泡10min，用毛笔轻轻刷洗种姜表面,用自来水冲洗2h，沥干水分。在38℃恒温培养箱进行热处理4周，使病毒饨化失活，同时可诱导出不定芽，待长出2 ~ 5cm左右的芽后再进行茎尖脱毒。将长出新芽切下，用流水冲洗干净，置超净工作台上，用75%酒精处理30秒，再用0.1%升汞消毒数分钟，无菌水冲洗6 ~ 8次后，在40倍体式显微镜下剥取0.2 ~ 0.3毫米茎尖分生组织，接种于诱导培养基上。待成苗后应用血清学鉴定, 获得脱毒苗。 2 脱毒苗的培养 以MS为基础培养基，以MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L为茎尖诱导分化培养基；以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L为生姜最适继代培养基；以MS+NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L为生根培养基。所配制的培养基中，糖浓度为3%，脂为0.7%，pH值为5.8。 诱导培养时，，先进行7天暗培养，再进行光培养。温度与光照条件要求与生姜生长期的光温条件相符，可控制在（25±2）℃，光照强度为3000 ~ 4000Lux，光照时间为14 ~ 16个小时。 3 组培苗的驯化及移栽 待培养瓶里的生姜苗具有3 ~ 4片叶，5 ~ 6条根，根长至2 ~ 4cm 时即可移栽。第1 d 在培养室里打开瓶盖(即半开半盖)，第2d把瓶盖揭掉，并在培养瓶中放人少许水，以防止组培苗的失水及培养基的污染，第3d移出培养室，放在室温中，以逐渐适应室外温度。移栽前应洗净附着在组培苗根部的培养基, 以免招致细菌繁殖, 导致组培苗感染腐烂死亡, 冲洗时谨防伤根,以确保移植成活。以蛭石+泥炭为移栽基质, 移栽后每天喷雾保湿, 栽后3d棚内相对湿度保持在85% ~ 90%, 1个月后就可考查移栽成活率。田间肥水管理与普通生姜相同，11月可收获姜种。 寻找生姜芽组培快繁的最佳方案 方法 以MS为基础培养基，设计生姜芽组培快繁的两条途径，选择生姜芽组培快繁的最佳培养方案。 1 茎尖 → 芽 最适培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L 2 茎尖 → 愈伤组织 → 芽 茎尖诱导愈伤组织的最适培养基为： MS+2,4-D2.0mg/L+KT1.0mg/L 愈伤组织诱导芽分化的最适培养基为： MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 生姜外植体的消毒 将外植体放在无菌超净台上，用75%酒精30s + 10% NaClO 15min + 0.1% HgCl2 10min + 50ug/L 青霉素（30 ~ 60min）与台外消毒相结合对外植体进行消毒，去污效果最佳。