细胞与原生质体培养.pdfVIP

第四章 植物细胞与原生质体培养 一、基本概念 1、植物细胞培养 （plant cell culture）： 指在离体条件下对单细胞或小细胞团进行培 养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。 2015/11/2 植物基因组工程实验室 2 2、原生质体培养： 通过一定方法除去细胞壁，而得到一个裸露的植物 细胞，即为原生质体(Protoplast)。  游离的原生质体像正常的 植物细胞那样具有全能性， 在一定条件下培养可以重 新再生出完整植株。 2015/11/2 植物基因组工程实验室 3 植物原生质培养和细胞融合可用于产生远缘杂种； 是目前植物细胞及基因工程的核心技术。 • 拟南芥叶片原生质体，转化GFP表 达载体，瞬时表达观察目的蛋白在 亚细胞中的定位情况。 • 红色为叶绿体自发荧光，绿色为 GFP 的荧光。 2015/11/2 植物基因组工程实验室 4 3、细胞及原生质体培养类型 单细胞培养（固体/液体） 细胞悬浮培养 2015/11/2 植物基因组工程实验室 5 4、基本流程 2015/11/2 植物基因组工程实验室 6 二、单细胞的分离 1、材料：最常用叶片作为外植体 2、分离方法：机械法和酶解法 2015/11/2 植物基因组工程实验室 7 机械法 外植体捣碎过滤离心 优点： 未经酶处理，细胞受到伤害小； 无需质壁分离，利于生理生化研究. 缺点： 细胞结构会受到一定伤害；完整细胞少 2015/11/2 植物基因组工程实验室 8 酶解法 利用果胶酶、纤维素酶等处理外植体材料， 分离具代谢活性的细胞。 降解中胶层，软化细胞壁 必须对细胞给予渗透压保护 优点：获得完整细胞多，可获得纯材料。 缺点：酶量要求严格，对细胞损伤大。 2015/11/2 植物基因组工程实验室 9 烟草悬浮细胞系建立 2015/11/2 植物基因组工程实验室 10 三、单细胞培养 对分离得到的单个细胞进行培养，诱导其分裂增 殖，形成细胞团，再通过细胞分化形成芽、根等 器官或胚状体，直到长成完整植株的技术。 培养方法：  平板培养  看护培