血红蛋白的提取和分离讲义.pptVIP

* 血红蛋白的提取和分离 1．凝胶色谱法 (1)概念 也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。 (2)原理 ①由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的 。 血红蛋白提取和分离的基本原理 分配色谱法 相对分子质量的大小 多孔球体 通道 ②当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使相对分子质量不同的蛋白质分子得以 。 相对分子质量 较小 较长 较慢 较大 凝胶外部 较短 较快 分离 2．缓冲溶液 (1)作用 在一定范围内，抵制外界的 对溶液pH的影响，维持pH 。 (2)配制 由1～2种 溶解于水中配制而成，通过 就可以得到在不同pH范围内使用的缓冲液。 酸和碱 基本不变 缓冲剂 调节缓冲剂 的比例 3．电泳 (1)概念 指 在电场的作用下发生 的过程。 (2)原理 在一定的 下，多肽、核酸等生物大分子的可解离基团会带上 或 ，在电场的作用下，这些带电分子会向着 的电极移动。 带电粒子 迁移 pH 正电 负电 与其所带电荷相反 (3)作用 电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 。 (4)方法 常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。 带电性质 大小 形状 迁移速度 各种分子的分离 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 [思维激活1] 凝胶色谱法和电泳法在实现分子分离的原理方面有何不同？ 提示　凝胶色谱法分离分子是依据分子质量大小，利用凝胶色谱柱使大分子优先洗脱出来，而小分子后分离出来。电泳法分离分子则是依据各种分子带电性质的差异，以及分子本身的大小，形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现在电场中将各种分子分离。 蛋白质分离的依据 蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 (1)凝胶色谱法 相对分 子质量 直径大小 运动方式 运动 速度 运动 路程 洗脱 次序 大 大于凝胶颗粒 空隙直径、被 排阻在外面 垂直向 下移动 较快 较短 先从凝 胶柱洗 脱出来 小 小于凝胶颗粒 空隙直径，可以 进入颗粒内部 垂直向下移 动，无规则 扩散进入凝 胶颗粒 较慢 较长 后从凝 胶柱洗 脱出来 (2)电泳法 ①含义：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 ②原理：一些生物大分子具有可解离的基团，在一定pH下，会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。因各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同，迁移速度不同，从而实现各种分子的分离。 ③常用方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。在测定蛋白质的相对分子质量时，通常使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，此方法也可用来分离蛋白质混合组分(亚基)。 【巩固1】 凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是 (　　)。 A．根据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小 B．根据蛋白质相对分子质量的大小 C．根据蛋白质所带电荷的多少 D．根据蛋白质溶解度的大小 解析　凝胶色谱法所用的凝胶实际上是一些微小多孔的球体，在小球内部有许多贯穿的通道，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不