GB/T 34756-2017猪轮状病毒病　病毒RT-PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 34756—2017 猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法 Porcine rotavirus disease —RT-PCR for detecting virus acid 2017-11-01 发布 2018-05-01 实施 发布 GB/T 34756—2017 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAT/TC 181)归口。 本标准起草单位:东北农业大学 、中国动物卫生与流行病学中心、河南牧业经济学院。 本标准起草人:乔薪環 、邵卫星、魏荣、崔文、唐丽杰、李一经、姜艳平、孙映雪、李卫华、徐耀辉。 I GB/T 34756—2017 猪轮状病毒病 病毒RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了猪轮状病毒RT-PCR检测方法的试剂、仪器设备、操作程序。 本标准适用于猪临床样品(新鲜粪便和小肠)及细胞培养物中猪轮状病毒核酸的检测。 2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AMV：鸟类 RNA 病毒反转录酶(avian myeloblastosis virus) bp：碱基对(base pair) DEPC :焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate) DNA :脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid) dNTPs :脱氧核糖核昔三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphates) PBS：磷酸盐缓冲液(phosphate-buffercd saline buffer) PCR：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) RNA：核糖核酸(ribonucleic acid) RRI：RNA 酶抑制剂(RNase ribonuclease inhibitor) RT：反转录(reverse transcriptase) RT-PCR :反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction) Tag 酶：Tag DNA 聚合酶(Tag DNA polymerase) 3试剂 除另有规定外，所用试剂应为分析纯 。提取病毒RNA所用试剂应使用无RNA酶的容器进行 分装。 3.1氯仿:常温保存。 3.2异丙醇。 3.3 75 %乙醇。 3.4二乙基焦磷酰胺(DEPC)0 3.5 Tag 酶。 3.6 AMVO 3.7 DNA 分子量标准(DL2000bp)o 3.8电泳缓冲液(TAE)(配制见A.l)0 3.9 1.5 %琼脂糖(配制见A.3)。 3.10猪轮状病毒阳性样品及阴性样品(见附录B)。 4仪器设备 4.1高速冷冻离心机。 1 GB/T 34756—2017 4.2 PCR扩增仪。 4.3核酸电泳系统。 4.4恒温水浴锅。 4.5 冰箱 （2 °C〜8 °C 、一20 °C ）。 4.6凝胶成像系统 （或紫外透射仪）。 4.7组织匀浆器或研钵。 4.8二级生物安全柜。 4.9 微量加样器 （0.5 卩L〜10卩L；2卩L〜20 心2