淋球菌mtrR基因突变和多重耐药关系的研究-医学微生物学专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 摘要 淋球菌IntrR基因突变和多重耐药关系的研究 摘要 目的 了解长沙地区淋球菌对抗菌药物的敏感性；研究淋球菌 mtrR(multiple transferable resistance Regulator)基因突变与淋球菌多重耐 药的关系。 方法(1)纸片扩散法检测56株淋球菌对5种抗生素的敏感性， 试管稀释法测定淋球菌对Triton x一100的MIC值。(2)PCR扩增 mtrR基因中最常发生突变的250个碱基进行聚合酶链反应一单链构 象多态性(PCR-SSCP)分析。(3)根据SSCP的结果选取16株标本， 扩增mtrR基因进行测序，将其核苷酸序列与标准株ATCCl9424进行 比较，确定突变的部位和类型。(4)采用半定量逆转录聚合酶链反应 检测mtrR基因突变株和敏感株．删rc基因的表达水平。 结果(1)在测定的5种抗生素中，淋球菌对壮观霉素的敏感 性最高，对青霉素的敏感性最低。淋球菌对青霉素、四环素、氧氟沙 星、头孢美唑和壮观霉素的耐药率分别为87．50％、85．72％、58．93 ％、32．14％和3．58％。56株临床分离菌对Triton X-100的MIC值≥ 16mg／ml的有3株，MIC值介于O．5～8．0mg／ml的有34株。(2)56 株淋球菌经SSCP分析，有41株带型与标准株不同，不同的带型共 分为3种。(3)16株测序的标本中，发生45位氨基酸Gly(GC_把)一 硕士号待论文 硕士号待论文 摘要 (GAC)Asp突变的有8株，105位His(CAC)一(TAC)Tyr突变的有6 株，肓2株同时出现这两个位点的突变。这16株细菌中只有1株对 两种抗生素耐药，其余15株都对3种或者3种以上的抗生素耐药。 出现，双位点突变的菌株不仅对5种抗生素全部耐药，而且其Triton X一100的MJC值也是≥16mg／ml。(4)两突变菌株组中mtrC基因 mRNA的平均表达量为3，7422±0．5704和4．2692±0．3017，高于敏感 菌株组1．1223±0。8878，差异性大故具有显著性意义(Po．05)。 结论 (1)长沙地区淋球菌流行株对青霉素、四环素和氧氟沙 星的耐药十分严重，对头孢美唑、壮观霉素敏感性较高；(2)mtrR 基因突变介导淋球菌的多重耐药；(3)第45位氨基酸Gly(GGC)一 (GAC)Asp和第105位His(CAC)一(TAC)Tyr的突变是淋球菌mtrR 基因突变的关键位点，而淋球菌对Triton X．100的高水平耐受可能需 要上述两个位点同时发生突变；(4)突变株mtrC基因的表达水平与 敏感株相比较明显上调。mtrR基因的突变能够提高mtrC基因的表 达，提示mtrR基因的突变可能导致淋球菌外膜蛋白合成增多，将抗 生索泵出细胞的能力也随之增强。 关键词： 淋病奈瑟茵， 基因突变，PCR—SSCP， RT-PCR，多重耐药 II —堡竺堂堡垒查 —堡竺堂堡垒查 丝 Correlation between multiple resistance of Neisseria gonorrhoeae and mutations in mtrR gene ABSTRACT Objective To investigate the in vitro antimicrobial susceptibility of Neisseria gonorrhoeae strains isolated in changsha and to study the correlation between multiple resistance and the mutations in mtrR gene． Methods (1)For the 56 clinical strains of N．gonorrhoeae studied，the susceptibility for five antibiotic agents was tested by disc diffusion method；the MIC(minimum inhibitory concentration)value of Triton