环氧化酶在食管上皮癌变中的表达及NSAIDs对食管癌细胞作用分析-病理学与病理生理学专业论文.docx

申史耩要l食管脱落上皮细胞的梭测 申史耩要 l食管脱落上皮细胞的梭测 豫对挝阏获取酶缀脆进行涂片、融氏染色及常觌病瑷诊断辩，运 用流式细胞仪(flow cytometⅨFCM)对食蛰拉网法获取的食管上皮细 施遴彳亍了DNA含餐、DNA倍体及缀胞丽期分析，同时采用间接免疫 荧光标记方法对上皮细胞中COX．1、COX．2、p53、p21／WAFl、p16、 cyctin D1歉CDK4的表达分羽进行了定量梭测。 2对食管鳞状细胞癌的研究 食管鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)新鲜手术切除标 本术居立郄取毒孝，以4％多聚甲醛／0，1M PBS(pH7。2)爽含0。1％ DEPC)固定约3小时，常规脱水、浸蜡、包埋及切片，H．E染色，由 嚣名有经验鳆痰邋医蟋分别进褥组织病理学诊龋。袋瘸羰使杂交方法 (in situ hybridization．ISH)对COX—l、COX一2、iNOS、bcl-2 mRNA 表达进行检测，并采用免疫缀织纯学(immunohistochemistry,IHC)方 法对COX．1、bax蛋白袭达进行检测。同时在相同部位取材，以70％ 冷乙醇固定，应照FCM对COX．1、COX-2、iNOS、beI-2、PCNA、cyclin D1、cyclin E、CDK4及p27蛋囱表达进行定擞检测。利用HPIASml000 寰清孵度彩色痪褒篷文教告分褥系统迸褥灰黢溺量分据，蒋ISH及IHC 染色结果转化为灰度值进行定激分析。 3食管鳞癌鲴憝培养 对食瞥鳞癌细胞株Eca．109、T1N及TE．13进行常规培养。分别 鼹察菲类围醇类抗炎药aspirin、indomethacin及NS098对各绥熬株静 作用。在倒嚣显微镜下观察应用3种药物后细胞的形态改变；用MTT 法溺定3种药耪分剐对3个缀艨株的惫长掷制清况及添热PGE2磊对细 胞生长的影响；采用FCM检测3种药物对癌细胞细胞髑期的影响及 COX-2、Bax、Bcl-2蛋岛表达的变纯；同时应孺免疫组仡对COX．2、 Bax、Bcl．2的表达进行了检测；还应用放免法(黜A)对细胞培养液中 PGE2的产爨迸行了检测；同时应用H．E染色、原位缺口末端标记技术 (TUNEL法)、遴射电镜及FCM法对3秘药物诱导痉缨胞凋亡情况进 行了检测。 结巢： 1 COX及细胞周期调控蒸因在食管上皮癌变进程中的表达 2 中踅摘要食警上皮交歪鬻绷憨一娶委}增生一瘥桶髓影戚涟程串，DNA銮璧 中踅摘要 食警上皮交歪鬻绷憨一娶委}增生一瘥桶髓影戚涟程串，DNA銮璧 明显增加，二倍体所占酉分比明强降低，辩储体率明鼹增高。如聪常 缨藏缰有l l。9冁(t2／101铡毙遴二倍髂，掰霭真燕魏舅转蒋，盈发增 生l{蕴26．8％(37／t38)为异嵇体，瘸缨爨缀酶异稳俸率必8寒+5懿。程 癌变进程中，处予G4G{麓缨施磷髭藏少而S期及GJM期缨胞瞬显增 多，细胞增糖指数(proliferation index，PI)明鼹增大，谯掰成癌细胞时 装凌蘩戈为突凄。 COX-2表达随上戍细胞弊黧性的增高嚼攫增加，尤英在瘩绷脆缀 中有较高淡遮，分剐与正常筑、轻增缝及黧爝缰眈较熬撵具有驻著褴 (P蠕。05)。COX-1在鍪组孛都露轻痰表达，蚤缝翊表达滗显著缝差异 扮G。05；COX一2与COX-1表达无显著裰关瞧阀。145,P=0．150)。 p53、cyclin D1投CDK4的表达都是随食管上皮细胞异型性的增 篙嚣鹱显媾粒，纽溺麓算其骞鑫蕃性}固。05；褥pt6及霹t／WAFt 裘这荽|l隧上皮绥藏异黧链盼鬻高褥显著减少，缓溺差冥臻藩(耍港．05)。 辩鼠p16与cyclin D1激达、p21／WAFl与CDK4表达呈撼著负相关烨 --0．394，P0．001和∥～0。43t,P0。001)。 2 COX及壤麓蔫藜调攘蒸嚣鬟食管SCC串瓣表遮 (1)COX-2 mRNA表达在不同分化的SCC孛表遮较蹇，褥畿菠 常食管上皮中报低，其表达随SCC分化程殿降低持续增蕊，各缀阕袭 达蓑异吴宥显著整(p≮巷。01)。COX-2 rmRNA袁逮还与浚滤深爱蒋美， 其表达在粘膜层及粘膜下层较商，随浸润深度增加而怠蒯减少，组间 差暴显著(pO，05)。毅耀FCM淡露COX-2骚皇表达鲶捻测获褥翱然 缨梁。COX。l mRNA爨篷杂交、免痰囊缎键学爱FCM梭瓣都涎实， COX-1在芷常食管上藏、癌旁上皮菠不圊分他斡SCC中部至低求平袭 达，与分化程度等临床病理参数溅显著相关性。COX-2与COX．1表达 无显著耩关缝(尹》§+05。 (2)iNOS mRNA在正常食管上皮无疑迭，在癌旁上皮有少爨袭 遮，磊在不闰分化SCC孛都裙较鬻表达；蕊袭达在不阏分纯组澜鸯巍 蔷瞧差异《p醺01)；FC