急慢性酒精中毒大鼠凝血功能变化与外伤性蛛网膜下腔出血发生及死亡机制研究-病理学与病理生理学(法医病理学方向)专业论文.docxVIP

汕头大学医学院博士学位论文 汕头大学医学院博士学位论文 汕头大学医学院博士学位论文 汕头大学医学院博士学位论文 中文摘要 1 背景及目的 酗酒是严重的社会公害之一，过度饮酒造成的酒精中毒已成为独立的、不容忽视的 致死因素。在法医学鉴定中，经常遇见饮酒后较轻微头颈部外伤引发的外伤性蛛网膜下 腔出血(traumatic subarachnoid haemorrhage, TSAH)，其发生率约占 TSAH 的 87%，死亡 率达 50%以上。由于目前对酒精和外力因素在 TSAH 发生及死亡机制中相互关系和作用 程度大小尚无统一认识，致使此类案件的鉴定往往争议较大，亦给法庭审判量刑带来困 难。因此，有必要深入研究酒后 TSAH 的发生及死亡机制，明确各因素在伤亡后果中的 参与度，为此类案件法医学鉴定及审判量刑工作提供必要的科学证据和理论参考。 本研究通过建立急慢性酒精中毒大鼠打击模型，检测不同时相点大鼠血乙醇浓度、 凝血功能及抗凝活性变化系列指标，观察各指标变化的内在联系，从血液的酒精毒理学 角度探讨急慢性酒精中毒大鼠 TSAH 发生机制。同时，检测血栓烷 A-2 及其受体表达并 监测心功能变化，从脑-心联系角度探讨急慢性酒精中毒大鼠 TSAH 死亡机制。 2 材料与方法 2.1 动物分组与模型建立 SPF 级成年雄性 SD 大鼠 90 只，体重 300±50g。实验动物分组见下表。实验大鼠灌 胃和打击处置后观察 0.5h，乙醚麻醉，腹主动脉采血并放血处死，立即开颅观察并记录 TSAH 发生率及出血量情况，留取脑、心、肝等组织冻存及固定处理。 组别(Group) 动物数(N) 处置(Treatment) 正常对照组(Control) 10 直接放血法处死，获取血液及组织检材 急性灌酒打击组(AA) 50 15ml/kg (52% v/v)食用白酒一次性灌胃，并分为 0.5h、 1h、2h、4h、6h 组，不同时相点予脑震荡性打击 急性灌水打击组(AW) 5 以等量蒸馏水代替，灌胃 2h 后予打击 慢性灌酒打击组(CA) 20 前 2 周 8ml/kg，后 2 周 12ml/kg，每日间隔 6h 白酒灌 胃 2 次，第 4 周末灌胃 2h 后予打击 慢性灌水打击组(CW) 5 以等量蒸馏水代替，余同 CA 处置 I PAGE PAGE IV III III 2.2 实验方法 观察实验大鼠的行为学、体重、血压、心电变化及脑组织病理学改变；气相色谱法 检测血乙醇浓度(BAC)；全自动凝血分析仪检测凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、 活化部分凝血活酶时间(APTT)及纤维蛋白原(FIB)；全自动血气分析仪检测pH值、血氧 饱和度(SaO2)、氧分压(PO2)、碳酸氢根(HCO3-)、剩余碱(BE)等7项血气分析指标；ELISA 法检测血浆中组织因子(TF)、组织因子途径抑制剂(TFPI)、组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、 纤溶酶原激活物抑制剂-1 (PAI-1)、D二聚体(D-D)及血栓烷B-2 (TXB-2)浓度；免疫组化 法及免疫印迹法进行定性、定位及定量检测脑及心组织的tPA、TXA2R表达情况。 统计TSAH发生率及死亡率，Fisher法分级TSAH。所有实验数据均采用SPSS 17.0及 Excel 2007进行统计学处理和分析。 3 结果 3.1 行为学表现及体重、血压变化 急性灌酒组大鼠酒后 0.5h 内兴奋性增强，此后逐渐出现昏睡、翻正反射消失等急性 酒精中毒表现，4-6h 后逐渐清醒。慢性灌酒组大鼠每次灌酒后均有急性酒精中毒表现， 灌酒 1 周后体重明显下降，至第 4 周末下降达 60g 以上(p0.01)。第 3 周始尾动脉压自 16.60±0.76 kPa 升高至 17.48±0.90 kPa (p0.05)。打击后，实验组大鼠均呈典型的脑震 荡表现，AA/AW/CW 及部分 CA 组大鼠 3-5sec 后渐至正常，55%(11/20) CA 组大鼠出现 角膜反射消失、四肢抽搐、口唇发绀、呼吸由深大转至浅慢，2-4min 内迅速死亡。 3.2 心电变化 脑震荡性打击后，各实验组均出现一过性心电基线漂移，心率从正常的 400 bpm 增 至 500-600 bpm，约 5-6sec 后渐至正常，而慢性灌酒组死亡大鼠在心电恢复正常后 30-60sec 内，心率骤减至 100-200 bpm 伴心律不齐，而后逐渐减慢，直至消失，心电呈 直线改变，此过程历时约 2-4min。 3.3 脑组织病理学观察和 TSAH 发生率及死亡率 急性灌酒组伤后脑组织轻度淤血、肿胀，多数有少量蛛网膜下腔出血，局限于脑干 腹侧面或小脑表面，脑神经元及胶质细胞轻度水变性。慢性灌酒组伤后脑组织中至重度 淤血、肿胀，多数有较